安絡(luò)小皮傘多糖的提取及其免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、中醫(yī)對菌類本草的認識，是依據(jù)中醫(yī)藥的理論體系來闡述的，由于菌類本草具有獨特的調(diào)理先天之本“腎”和后天之本“脾”的作用，所以受到了不少中醫(yī)藥學者的重視與運用。菌類本草中不少藥物具有“扶正補虛”的作用，可廣泛運用于精神不振、身倦體乏、咳嗽咳血、氣短自汗、畏寒肢冷、久病虛贏、舌淡、脈沉細無力等氣虛、陽虛、血虛、陰虛、陰陽俱虛的患者。安絡(luò)小皮傘是一種分布于我國吉林、遼寧等地的擔子菌綱真菌，是一種長期被民間食用和藥用的菌類本草。本研究以安絡(luò)小皮傘

2、多糖(Marasmiusandrosaceuspolysaccharide，MAP)粗品為原料，進行免疫活性多糖的提取、純化并對分離純化得到的各個安絡(luò)小皮傘多糖組分進行了免疫活性評價，篩選出具有明顯免疫活性的安絡(luò)小皮傘多糖組分MAP60，在此基礎(chǔ)上，就MAP60對免疫抑制小鼠非特異性免疫、特異性免疫功能的影響進行了研究，并采用分子生物學技術(shù)手段研究其免疫調(diào)節(jié)作用機制。 1.安絡(luò)小皮傘多糖的提取工藝研究 目的：安絡(luò)小皮傘多

3、糖最佳提取條件的確定。 方法：相關(guān)研究表明，影響多糖提取率的主要因素有乙醇濃度、提取溫度、提取時間等。為確定安絡(luò)小皮傘水溶性多糖的最佳提取條件，本實驗首先采用乙醇濃度為60％～100％，水提溫度為50℃～90℃，水提時間為1h～5h，進行單因素試驗，以確定提取條件范圍。根據(jù)單因素實驗結(jié)果，將醇沉濃度、水提溫度、水提時間三項作為考察因素，進行響應(yīng)面分析，確定最佳提取條件。對提取到的粗多糖繼續(xù)進行純化，再對純化后多糖進行乙醇分級，得

4、到3個安絡(luò)小皮傘多糖組分：MAP40、MAP60、MAP80。 結(jié)果：通過單因素試驗和響應(yīng)面分析，確定了安絡(luò)小皮傘多糖的最佳提取條件：醇沉濃度為90％、水提溫度為80℃、水提時間為5h。 結(jié)論：當采取最佳的提取條件提取安絡(luò)小皮傘多糖時，此時安絡(luò)小皮傘多糖得率最高，可以達到51.44％。 2.安絡(luò)小皮傘多糖免疫活性組分的篩選 目的：對安絡(luò)小皮傘多糖中具有免疫調(diào)節(jié)作用的組分進行篩選。 方法：對MAP4

5、0、MAP60、MAP80組分進行體外免疫活性測定，分別檢測其對T淋巴細胞、B淋巴細胞、腹腔巨噬細胞增殖能力的影響。 結(jié)果：MAP40對T淋巴細胞、B淋巴細胞、腹腔巨噬細胞增殖作用不明顯，MAP60、MAP80均具有協(xié)同有絲分裂原促進T淋巴細胞增殖并提高腹腔巨噬細胞增殖的功能。 結(jié)論：MAP60、MAP80是MAP的免疫活性組分?？紤]到提取成本及多糖含量等因素，選取MAP60組分繼續(xù)深入研究其免疫活性。 3.MA

6、P60免疫活性研究 目的：檢測MAP60的免疫活性。 方法：采取皮下注射環(huán)磷酰胺的方法誘導(dǎo)免疫抑制模型。用非特異性免疫及體液免疫、細胞免疫的相關(guān)指標，評價MAP60對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫功能低下小鼠免疫功能的影響。 結(jié)果：皮下注射環(huán)磷酰胺后，小鼠的非特異性免疫、細胞免疫和體液免疫功能均有所抑制。免疫抑制小鼠腹腔注射MAP60后，MAP60可以增強免疫抑制小鼠非特異性免疫功能如提高吞噬細胞的吞噬功能、提高免疫抑制小鼠

7、脾指數(shù)、提高免疫抑制小鼠淋巴細胞水平；增強免疫抑制小鼠的細胞免疫功能如提高遲發(fā)超敏反應(yīng)能力和淋巴細胞轉(zhuǎn)化率；增強免疫抑制小鼠的體液免疫功能如提高抗體分泌水平。 結(jié)論：MAP60可以提高免疫抑制小鼠的非特異性免疫、細胞免疫、體液免疫功能，能有效拮抗環(huán)磷酰胺對小鼠免疫功能的抑制作用。 4.MAP60免疫調(diào)節(jié)作用機制的探討 目的：從分子和基因水平分析MAP60的作用機制。 方法：采用酶聯(lián)免疫吸附實驗對免疫抑制小

8、鼠血清及淋巴細胞培養(yǎng)液中IL-1、IL-2、INF-α、IFN-γ的分泌水平進行檢測，通過反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測MAP60對免疫抑制小鼠脾細胞中IL-2mRNA、IFN-γmRNA和腹腔巨噬細胞中IL-1mRNA、INF-αmRNA表達的影響。 結(jié)果：MAP60可以提高IL-1、IL-2、INF-α、IFN-γ在外周血中和免疫細胞培養(yǎng)上清液中的水平，提高腹腔巨噬細胞中IL-1mRNA、INF-αmRNA的表達，提高小鼠脾細胞中I