Morganella morganii J-8中羰基不對(duì)稱還原酶的分離純化及性質(zhì)研究.pdf

1、隨著醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、食品、精細(xì)化工等行業(yè)對(duì)光學(xué)純手性中間體需求的增長，人們已充分認(rèn)識(shí)到手性的重要。酶法生物催化合成手性化合物因其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)成為近年來國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。為深入研究該轉(zhuǎn)化過程中酶反應(yīng)機(jī)制，進(jìn)行酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)的研究，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和理論價(jià)值。 本實(shí)驗(yàn)室篩選得到的MorganellamorganiiJ-8菌株，可將底物1-苯基-2-甲氨基丙酮(MAK)專一性地轉(zhuǎn)化為d-偽麻黃堿。本研究以Morganellamor

2、ganiiJ-8為出發(fā)菌株，對(duì)其產(chǎn)羰基不對(duì)稱還原酶的產(chǎn)酶條件、純化以及酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究，結(jié)果如下： 經(jīng)對(duì)產(chǎn)酶條件的優(yōu)化，確定了產(chǎn)酶的較適培養(yǎng)基：葡萄糖3％、蛋白胨2.5％、酵母膏0.5％、K2HPO40.3％、MgSO4·7H2O0.2％、NaCl0.2％。最佳產(chǎn)酶條件是培養(yǎng)基初始pH7.5，以24h為最佳接種種齡；30℃，150rpm搖床培養(yǎng)為36h。 對(duì)粗酶的基本性質(zhì)進(jìn)行了研究，酶的最適作用溫度和最適PH分別是30℃

3、和7.5。在pH5～8范圍內(nèi)酶的穩(wěn)定性較好，35℃以下比較穩(wěn)定。 菌體超聲破碎后，經(jīng)硫銨沉淀、PhenylSuperose疏水柱層析、DEAD陰離子柱層析和非變性凝膠電泳四步純化獲得SDS-PAGE電泳純的羰基不對(duì)稱還原酶。亞基分子量為42.5kD。HPLC蛋白柱分析酶的分子量，分子量約為84.1kD，初步認(rèn)為該酶為二聚體蛋白。 對(duì)所得到的部分純化酶的酶學(xué)性質(zhì)做了初步研究，以NADH作為反應(yīng)的輔酶時(shí)粗酶的酶活相對(duì)于以NA