光合細(xì)菌羰基還原酶不對(duì)稱(chēng)加氫催化體系的研究.pdf

1、隨著人們對(duì)不對(duì)稱(chēng)合成手性化合物的深入研究，生物不對(duì)稱(chēng)加氫發(fā)展為現(xiàn)代研究的熱點(diǎn)和焦點(diǎn)。生物催化一般選擇微生物整體細(xì)胞為催化劑，因其具有反應(yīng)條件溫和、效率高、產(chǎn)物比較單一等優(yōu)點(diǎn)，后來(lái)研究發(fā)現(xiàn)其反應(yīng)體系中存在酶位點(diǎn)選擇性低、底物濃度的限制等問(wèn)題。目前，研究人員利用分離純化的羰基還原酶還原潛手性化合物，不僅可以增加酶與底物的接觸機(jī)會(huì)，提高光學(xué)純度，而且可以進(jìn)一步了解酶的作用機(jī)制，因此酶法還原再次掀起了國(guó)內(nèi)外研究手性化合物的新浪潮。本課題一方面從

2、光合細(xì)菌中分離純化出羰基還原酶，并對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究;另一方面是建立羰基還原酶催化體系，并優(yōu)化其催化條件，選擇催化的最適底物，為研究酶催化機(jī)制和實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
　　其主要內(nèi)容如下:
　　1.通過(guò)超聲破碎、硫酸銨沉淀、DEAE-Sephadex A-25陰離子交換層析三步純化分離得到一種較純的依賴(lài)于輔酶NADPH的羰基還原酶。該酶的比活從0.9U/mg提高到36U/mg，純化倍數(shù)為40。對(duì)其進(jìn)行SDS-PAGE電泳

3、分析，顯示一條帶，并測(cè)得其相對(duì)分子量約為37kD。
　　2.采用紫外測(cè)定酶活，對(duì)該酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究。結(jié)果表明:酶的最適pH值為8，最適溫度為37℃，在pH值為7～9之間比較穩(wěn)定，但其熱穩(wěn)定性較低。該酶對(duì)苯乙酮的米氏常數(shù)Km值和最大反應(yīng)速率Vmax分別為0.26mmol/L和2.4μmol/(min mg)。
　　3.構(gòu)建了輔酶再生體系、羰基還原酶催化苯乙酮體系以及酶催化與輔酶再生偶聯(lián)體系，并對(duì)催化體系進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，