交聯(lián)醇腈酶不對稱催化合成氰醇的研究.pdf

1、手性氰醇是一類醫(yī)藥化工領(lǐng)域中具有重要學(xué)術(shù)價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值的中間體。手性氰醇的合成對于醫(yī)藥化工中間體化合物的開發(fā)具有重要的理論和應(yīng)用意義。醇腈酶作為一種生物催化劑，因其優(yōu)良的立體選擇性，應(yīng)用于催化手性氰醇的合成。由于醇腈酶在穩(wěn)定性和可重復(fù)利用性方面尚存在局限，因此對酶的固定化技術(shù)提出了更高要求。我們對醇腈酶的固定化方法進(jìn)行了研究并用于不對稱催化氰醇化反應(yīng)。
　　 醇腈酶經(jīng)硫酸銨沉淀處理，戊二醛交聯(lián)得到酶交聯(lián)體。利用交聯(lián)酶和游離酶不對

2、稱催化氰醇化反應(yīng)，比較對46種底物的催化效果。交聯(lián)酶對芳香族醛類苯甲醛的催化效果最好，氰醇化產(chǎn)物e.e.值為94％。呋喃醛和噻吩醛氰醇化產(chǎn)物e-e.值均大于85％，丙酮、2-丁酮、2-戊酮、2-己酮等甲基酮類底物氰醇化產(chǎn)物e.e.值超過65％，環(huán)戊醛和環(huán)己醛氰醇化產(chǎn)物e.e.值分別提高了53％和73％。通過與游離酶催化效果比較，認(rèn)為醇腈酶交聯(lián)體不對稱催化合成氰醇的效果更佳。
　　 對醇腈酶交聯(lián)體應(yīng)用條件進(jìn)行了研究。得到最適催化p

3、H為4.5，最適催化溫度為10℃?？疾炝司彌_液pH值、反應(yīng)溫度、有機(jī)溶劑、水含量、反應(yīng)物濃度和交聯(lián)酶濃度6個(gè)因素對酶促反應(yīng)初始速率、轉(zhuǎn)化率和產(chǎn)物光學(xué)純度的影響，確定了醇腈酶交聯(lián)體最適催化體系為水-異丙醚反應(yīng)體系，水含量20％，底物和氫氰酸的最適濃度分別為0.2mol/L，和0.6mol/L，交聯(lián)酶的最適濃度為10U/ml。最適條件下交聯(lián)酶促反應(yīng)速率和產(chǎn)物e.e.值分別為60μmol/h和96％。交聯(lián)酶循環(huán)使用5次后，產(chǎn)物e.e.值保持在