E-cad-cat復合體在所謂肺硬化性血管瘤中的表達.pdf

1、所謂肺硬化性血管瘤(So-calledpulmonarysclerosinghemangioma，PSH)是由Liebow等首次報道的肺部少見腫瘤，迄今為止其性質及組織來源仍未十分明確。盡管大多數患者在臨床上呈“良性”經過，但也有局部浸潤及淋巴結轉移的報道。研究結果表明該腫瘤起源于原始呼吸道上皮細胞，認為該腫瘤中的兩種形態(tài)不同的主要細胞成分(立方細胞、多角形細胞)為同一細胞起源，并把這一現象解釋為它們分別處于不同的分化狀態(tài)所致。我們在以

2、往的研究中發(fā)現，乳頭狀區(qū)表面以及血管瘤樣區(qū)腔內襯的立方細胞與分化成熟的肺泡Ⅱ型細胞十分相似，而間質內的多角形細胞具有多向分化潛能。 E-cadherin是一種鈣依賴的細胞粘附分子，主要介導上皮細胞的細胞間粘附，它的胞內段與catenin形成復合體對細胞間穩(wěn)定粘附起著至關重要的作用，這種復合體的形成也是發(fā)育成熟的正常上皮細胞的特征之一。p120ctn為catenin家族成員之一，并能夠調節(jié)鈣粘蛋白的更新和代謝，在細胞的粘附、運動中

3、起重要作用，與細胞遷移、侵襲等有重要關系。本實驗采用S-P免疫組化方法檢測PSH中E-cad/cat復合體的表達，并以肺炎性假瘤中增生的Ⅱ型肺泡細胞為對照，探討兩種形態(tài)不同的細胞分化狀態(tài)。 材料和方法 1.1材料來源 25例PSH及8例肺炎性假瘤均來自于1995～2004年中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院手術切除標本。標本經中性福爾馬林固定，石蠟包埋。 1.2方法 將標本制成4μm連續(xù)切片，經脫蠟，脫苯，

4、水化后，進行HE和鏈菌素抗生物素蛋白-過氧化物酶(S-P法)免疫染色后光鏡觀察。E-cadherin、β-catenin為鼠抗人單克隆即用型抗體(購于福州邁新公司)，p120ctn鼠抗人單克隆抗體(購于美國Transduction公司)稀釋濃度為1∶200，SP染色試劑盒、DAB顯色液為福州邁新公司產品。。三種抗體均用高溫高壓抗原修復，DAB顯色后用蘇木素復染。PBS緩沖液代替一抗為陰性對照。 1.3結果判定 每張切片隨

5、機選取5個高倍視野，每高倍視野分別計數100個不同形態(tài)的兩種瘤細胞，無細胞著色為(-)，陽性細胞數≤25％為(+)，26～50％為(++)，51～75％為(+++)，≥76％為(++++)。 結果 2.1大體及組織學形態(tài)腫物為境界清楚的實性病灶，無包膜，顏色灰黃，局部出血時呈暗紅色，質地中等。光鏡下腫瘤由實性區(qū)、乳頭區(qū)、血管瘤樣區(qū)和硬化區(qū)四種結構混合構成，四種結構有不同程度的移行。腫瘤細胞主要有兩種：一種是位于實性區(qū)和乳

6、頭區(qū)內的多角形瘤細胞，另一種是位于乳頭區(qū)表面和各種腔隙內被覆的立方細胞。位于實性區(qū)內的少量立方細胞呈簇狀或腺樣。在大部分PSH的組織結構中可見數量較多的嗜堿性肥大細胞。間質內可見淋巴細胞等炎細胞浸潤，還可見含鐵血黃素沉積、鈣化和骨化。 2.2免疫組織化學結果 本組實驗的25例PSH中的立方細胞(不包括血管瘤樣區(qū)的腔內襯細胞)，E-cadherin、β-catenin和p120ctn均呈胞膜強陽性表達，其膜著色清楚、連續(xù)，

7、強陽性(++++)表達率為100％，β-catenin在胞膜強陽性表達的同時出現胞質表達。血管瘤樣區(qū)的腔內襯細胞三種分子均呈胞質和胞膜強陽性表達。多角形細胞中三種上皮粘附分子的陽性表達率則明顯降低，表達強度明顯減弱，且陽性反應信號以胞質為主。E-cadherin呈不表達或弱陽性表達，β-catenin胞膜表達缺失伴部分胞質表達，p120ctn以胞質表達為主伴少量胞膜表達。三種粘附分子在每例多角形細胞的陽性表達細胞數相差很大，在同一例不同

8、部位的多角形細胞陽性表達亦有很大差異。8例肺炎性假瘤中增生的Ⅱ型肺泡細胞其E-cadherin、β-catenin和p120ctn表達與PSH中的立方細胞的表達情況相似。 討論自從1956年Liebow等首次報告并命名了肺硬化性血管瘤以來，大量的研究結果使得人們對PSH的起源和性質等有了逐步深入的認識。如Devouassous-Shisheborran等研究發(fā)現可特異性表達于肺胚芽上皮及分化的肺泡Ⅱ型上皮或Clara細胞中的TT

9、F-1，在PSH的立方細胞和多角形細胞均呈明確的胞核強陽性表達，從而證實了PSH源于原始呼吸道上皮細胞。在我們以往的研究中發(fā)現，盡管立方細胞TFF-1呈陽性表達，但其SP-B和CK也呈陽性表達，并發(fā)現胞質內有特征性的板層小體存在，說明該細胞類似于Ⅱ型肺泡細胞；而多角形細胞除TTF-1陽性外，Vimentin也呈強陽性反應，而CK、EMA以及NSE等神經內分泌標記也有散在弱陽性表達，但SP-B呈陰性，說明多角形細胞與立方細胞不同，具有多向

10、分化的潛能。為了進一步證實這一點，我們選用了正常上皮細胞較為恒定表達的E-cadherin/catenin復合體標記物，并與一般肺炎性假瘤中經常出現的增生性Ⅱ型肺泡細胞進行比較。結果發(fā)現E-cadherin、β-catenin和p120ctn在PSH的立方細胞中均呈胞膜強陽性表達，β-catenin在胞膜強陽性表達的同時出現胞質表達，而這一表達情況與肺炎性假瘤中增生的Ⅱ型肺泡細胞的表達情況相似，提示PSH中的立方細胞在腫瘤形成過程中向Ⅱ

11、型肺泡細胞分化的現象。多角形細胞的E-cadherin、β-catenin和p120ctn的表達與表面立方細胞表達情況截然不同，不僅其陽性表達率明顯下降，表達強度明顯減弱，而且出現胞質內的表達。提示多角形細胞與立方細胞不同，他們可能分別處于不同的分化狀態(tài)。另外，我們發(fā)現三種粘附分子在每一例的多角形細胞中的陽性細胞數相差很大，而且在同一例的不同部位其陽性細胞數也有很大差異，即多角形細胞的三種粘附分子表達存在著異質性。該結果與Nagata等

12、的結果(三種上皮標記物EMA、SC和SurfactantApoprotein在PSH的多角形細胞中存在異質性著色)有相似之處。之所以出現這樣的結果可能與起源于原始呼吸道上皮的多角形細胞可能處于不同的分化程度或向不同方向分化有關。 眾所周知，細胞間粘附力下降是腫瘤轉移的始動環(huán)節(jié)。E-cadherin存在于上皮細胞膜上，其功能是介導細胞與細胞之間的粘附，維持細胞結構和形態(tài)的穩(wěn)定。E-cadherin碳末端胞內肽段與β-catenin

13、或γ-catenin結合，后者又通過α-catenin與肌動蛋白細胞骨架結合。另外E-cadherin的juxtamembrane(JMD)結構域與p120ctn的Arm域結合，這樣就形成了cad-cat復合物。該復合物中E-cadherin或catenin的改變均可影響其粘附功能，表現為細胞間粘附力下降，細胞極性喪失，排列松散，易發(fā)生脫離、侵襲和轉移。盡管PSH患者中絕大多數呈“良性”經過，但到目前為止已有10例以上PSH發(fā)生肺門、支

14、氣管周及葉間局部淋巴結轉移的報道，在其淋巴結轉移灶中可見大量成片狀的多角形細胞而立方細胞極少見或無。在本組的25例PSH中，均未見淋巴結轉移的情況發(fā)生，無法進行轉移灶的觀察，但從多角形細胞缺乏形成E-cad/cat復合體的能力這一點上，也支持多角形細胞不如立方細胞分化成熟的觀點。 本實驗中發(fā)現PSH中血管瘤樣區(qū)的腔內襯細胞E-cadherin、β-catenin和p120ctn均為胞漿、胞膜陽性表達，而組織中的血管內皮無任何著色