可降解外套管減輕自體移植靜脈內(nèi)膜增生的機(jī)制研究.pdf

1、目的:該課題以可降解材料聚乳酸-聚乙醇(PLGA)作為外套管材料,研究PLGA外套管移植靜脈抑制VG內(nèi)膜增生的可行性以及長期效果觀察;探索VG再狹窄和可降解外套管抑制VG內(nèi)膜增生的分子生物學(xué)和生物力學(xué)機(jī)制.方法:1、PLGA的生物學(xué)評(píng)價(jià).對(duì)該實(shí)驗(yàn)使用的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)進(jìn)行了細(xì)胞毒性試驗(yàn)、皮下包埋試驗(yàn),以評(píng)價(jià)其細(xì)胞毒性、組織相容性及降解時(shí)間.細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察法觀察27天L-929細(xì)胞在受試材料邊緣的生長情況及細(xì)胞形態(tài)變化;

2、用PLGA、陰性和陽性對(duì)照材料浸提液培養(yǎng)細(xì)胞,MTT法測(cè)定L-929細(xì)胞的相對(duì)增殖率及細(xì)胞毒性.將PLGA及陽性對(duì)照等材料埋置于SD大鼠皮下,分別于術(shù)后3天、2、4、6、8、12周觀察材料周圍組織炎性細(xì)胞浸潤程度、包裹組織厚度.2、PLGA外套管減輕移植靜脈內(nèi)膜增生的動(dòng)物模型的建立及可行性研究.制作內(nèi)徑0.4cm長6cm的PLGA圓柱空心管;將雜種犬的股靜脈調(diào)轉(zhuǎn)以端-端吻合方式移植到同側(cè)的股動(dòng)脈,其中一側(cè)靜脈加PLGA材料的外套管(外套

3、管組),另一側(cè)靜脈單純移植(對(duì)照組).術(shù)后3d,2、4、6、12周再次手術(shù)取出靜脈.根據(jù)HE染色切片測(cè)量靜脈內(nèi)膜、中層厚度及面積;維多利亞藍(lán)-麗春紅染色觀察膠原纖維和彈力纖維的變化;掃描電鏡觀察靜脈壁內(nèi)皮細(xì)胞完整性及形態(tài)變化;免疫組化兔抗人Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體染色評(píng)價(jià)靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的完整性,免疫組化鼠抗人平滑肌α-actin抗體染色觀察靜脈壁平滑肌細(xì)胞分布.配對(duì)比較對(duì)照組和外套管組之間的差異.3、PLGA外套管減輕移植靜脈內(nèi)膜增生的力學(xué)機(jī)制

4、.靜脈移植后即刻及再次手術(shù)前,電磁流量計(jì)測(cè)量外套管組和對(duì)照組的移植靜脈中段流量波形,超聲多普勒測(cè)量移植靜脈中段的內(nèi)徑,根據(jù)公式計(jì)算靜脈中段的壁面切應(yīng)力(WSS)變化.靜脈移植術(shù)后12周再次手術(shù)取出靜脈,血管力學(xué)檢測(cè)儀測(cè)量靜脈的p-V關(guān)系,測(cè)量靜脈零應(yīng)力狀態(tài)下的張開角,利用指數(shù)函數(shù)公式擬合,計(jì)算靜脈壁周向應(yīng)力及沿靜脈壁分布.4、PLGA外套管減輕移植靜脈內(nèi)膜增生的分子生物學(xué)機(jī)制.靜脈移植術(shù)后24周再次手術(shù)取出靜脈,根據(jù)HE染色測(cè)量靜脈內(nèi)膜

5、、中層厚度及面積;維多利亞藍(lán)-麗春紅(VB)染色觀察膠原纖維和彈力纖維的變化;透射電鏡觀察靜脈內(nèi)膜和中層的炎性細(xì)胞浸潤、平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡、細(xì)胞外基質(zhì)變化;免疫組化鼠抗人平滑肌α-actin抗體染色觀察靜脈壁平滑肌細(xì)胞分布,免疫組化細(xì)胞增殖核抗原(PCNA)抗體染色檢測(cè)靜脈壁增殖細(xì)胞,原位DA片段末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)靜脈壁凋亡細(xì)胞,免疫組化兔抗人轉(zhuǎn)移生長因子(TGF)-β、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2、9、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑