他克莫司緩解大鼠自體移植靜脈橋內(nèi)膜增生的研究.pdf

1、目的：冠狀動(dòng)脈疾?。–AD）是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊病理性聚集于冠脈管腔，導(dǎo)致其變狹窄后堵塞的一種疾病。冠脈血流恢復(fù)越早越可能對(duì)心肌功能恢復(fù)產(chǎn)生至關(guān)重要作用。目前治療的主要外科手段是用自體血管繞過(guò)堵塞的血管段形成旁路，即冠脈搭橋術(shù)（CABG）。人大隱靜脈（SV）一直被用作主要移植血管，因?yàn)槠鋵?duì)大多數(shù)患者而言不是不可或缺，容易工作，容易采集，管腔巨大等。而其主要缺點(diǎn)是較低的通暢率。目前針對(duì)移植失敗有不少治療方法，比如No-touch技術(shù)，內(nèi)

2、窺鏡靜脈采集，使用抗血小板藥物，基因治療等。但靜脈橋的中遠(yuǎn)期通暢率并無(wú)明顯改變。故如何提高中遠(yuǎn)期通暢率成為了研究熱點(diǎn)。本研究將通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)探討他克莫司是否能抑制大鼠自體靜脈移植術(shù)后靜脈橋內(nèi)膜增生，為藥物治療CABG術(shù)后再狹窄提供參考。
　　方法：隨機(jī)選用健康雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠28只，體重200-240g。隨機(jī)分為他克莫司實(shí)驗(yàn)組（n=14）和安慰劑對(duì)照組（n=14）。實(shí)驗(yàn)組給以他克莫司(0.2m

3、g/kg)肌注，對(duì)照組肌注相同體積生理鹽水，每天1次，持續(xù)1周。處理完畢后行自體右頸外靜脈-頸總動(dòng)脈移植術(shù)，術(shù)后繼續(xù)原方案干預(yù)。于術(shù)后第2周和第4周處死大鼠，采集靜脈橋。制備組織病理切片，應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析軟件測(cè)量新生內(nèi)膜厚度；提取組織蛋白，蛋白印跡技術(shù)（Western Blot）技術(shù)檢測(cè)p27蛋白表達(dá)情況。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分：培養(yǎng)人大隱靜脈平滑肌細(xì)胞。增殖實(shí)驗(yàn)按：1、實(shí)驗(yàn)組A（0.4nmol·L-1他克莫司），2、實(shí)驗(yàn)組B（4nmol·

4、L-1他克莫司），3、實(shí)驗(yàn)組C（40nmol·L-1他克莫司），4、實(shí)驗(yàn)組D（400nmol·L-1他克莫司），5、實(shí)驗(yàn)組E（4000nmol·L-1他克莫司），6、對(duì)照組（等量PBS）。干預(yù)4天后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。遷移實(shí)驗(yàn)按：1、實(shí)驗(yàn)組A（2nmol·L-1他克莫司+PDGF-bb），2、實(shí)驗(yàn)組B（20nmol·L-1他克莫司+PDGF-bb），3、實(shí)驗(yàn)組C（200nmol·L-1他克莫司+PDGF-bb），4、實(shí)驗(yàn)組D（2

5、000nmol·L-1他克莫司+PDGF-bb），5、對(duì)照組（等量PBS+PDGF-bb），干預(yù)24小時(shí)，Transwell小室法檢測(cè)細(xì)胞遷移情況。
　　結(jié)果：大鼠自體頸外靜脈-頸總動(dòng)脈移植術(shù)后，第2周時(shí)，新生內(nèi)膜厚度比較，第2周時(shí)新生內(nèi)膜厚度比較，他克莫司實(shí)驗(yàn)組明顯小于對(duì)照組[（20.56±4.55）μm VS（28.35±5.86）μm,P＜0.05]。第4周時(shí)，他克莫司實(shí)驗(yàn)組仍明顯小于對(duì)照組[（36.22±6.33）μm V

6、S（62.13±7.60）μm,P＜0.01]。Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)術(shù)后2周新生內(nèi)膜中p27蛋白表達(dá)明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）,4周更為顯著。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中，培養(yǎng)4天后，相比對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組A組的抑制率為8％，B組抑制率為19%，C組抑制率為38%，D組抑制率為61%，E組抑制率為99%。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)中，干預(yù)24小時(shí)后，加入他克莫司組的遷移細(xì)胞數(shù)均小于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01