基因多態(tài)性影響肝移植術(shù)后早期他克莫司代謝的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　肝移植是治療終末期肝病最有效的手段，他克莫司（TAC，F(xiàn)K506）是肝移植患者術(shù)后免疫抑制治療方案的基礎(chǔ)用藥，但其目前存在治療窗窄、個(gè)體間藥物代謝動(dòng)力學(xué)差異大等特點(diǎn)，并且與細(xì)胞因子、藥物代謝酶等相關(guān)基因的基因多態(tài)性有關(guān)。故本課題旨在探究基因多態(tài)性對(duì)肝移植術(shù)后早期他克莫司代謝的影響及其機(jī)制，以便篩選出TAC個(gè)體化用藥的遺傳標(biāo)志物。
　　方法：
　　應(yīng)用Sequenom MassARRAY基因分型技術(shù)檢測(cè)肝移植

2、供受體細(xì)胞色素P4503A亞家族多肽5（CYP3A5）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、Toll樣受體4（TLR4）等基因部分標(biāo)簽SNP（單核苷酸多態(tài)性）位點(diǎn)的分布；回顧性調(diào)查并記錄肝移植患者術(shù)后4周內(nèi)的臨床資料；分析供受體基因的SNP結(jié)果與TAC（FK506）濃度/劑量比值（C/D值）的相關(guān)性。采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)和免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)供肝組織IL-6 mRNA和蛋白表達(dá)量；應(yīng)用定點(diǎn)突變和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建 IL-6 r

3、s1800796位點(diǎn)不同基因型 LO2肝細(xì)胞株（LO2C和LO2G），通過(guò)構(gòu)建肝細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型探究該位點(diǎn)SNP對(duì)肝細(xì)胞生物學(xué)功能影響。
　　結(jié)果：
　　供受體CYP3A5 rs776746位點(diǎn)、供體TLR4 rs1927907位點(diǎn)以及供體IL-6 rs1800796位點(diǎn)SNP與TAC代謝密切相關(guān)（P<0.05），并且在蛋白和mRNA水平上，TAC快代謝組供肝組織IL-6表達(dá)量高于慢代謝組（P<0.05）。缺氧復(fù)氧6小時(shí)后，

4、與LO2G基因型細(xì)胞株相比，LO2C細(xì)胞株的AST表達(dá)量低，而IL-6和STAT3表達(dá)增加更加明顯，細(xì)胞活性更高（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　本課題驗(yàn)證了供受體CYP3A5 rs776746位點(diǎn)SNP與TAC代謝相關(guān)，還新發(fā)現(xiàn)供體IL-6 rs1800796位點(diǎn)和供體TLR4 rs1927907位點(diǎn)SNP影響肝移植術(shù)后早期TAC代謝。其中在體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)IL-6 rs1800796位點(diǎn)SNP影響肝細(xì)胞缺氧復(fù)氧（H/R）