胰島素對犬自體移植靜脈的保護及其新生內膜過度增生抑制的研究.pdf

1、研究背景：
　　近年來，隨著社會經(jīng)濟發(fā)展、人民生活水平提高、就業(yè)壓力增大、生活方式改變、人口急速老齡化和易患因素發(fā)病率的逐年上升，心血管疾病已成為危害人們健康的“第一殺手”。由于科技進步，針對心血管疾病的藥物和介入治療取得了長足進步，然而，冠狀動脈旁路移植術（CABG）和周圍動脈旁路移植術在復雜心血管病變的處理上仍有著不可替代的作用。自體靜脈移植物，尤其是大隱靜脈移植物（SVG），由于方便取材和管段較長，是動脈旁路移植術中最常用移

2、植物。但是，較之乳內動脈移植物（IMAG），較低的通暢率嚴重降低了SVG的臨床應用價值。因此，如何提高SVG通暢率，仍是眾多學者研究的熱點。越來越多的臨床證據(jù)表明極化液（GIK）/胰島素應用可明顯改善CABG術后糖尿病和非糖尿病患者的預后，而且，合模擬動脈旁路移植術模型，分別于移植靜脈再灌注前5分鐘直到之后4小時，給予以下4種液體以2mL/kg/h靜脈輸注：(1)假手術組(Sham：0.9％NaCL)；(2)生理鹽水（Vehicle:0

3、.9％氯化鈉）；(3)GK（葡萄糖-鉀液:葡萄糖:250g/L,氯化鉀：80mmol/L）；(4)GIK(葡萄糖:250g/L,胰島素:60U/L,氯化鉀：80mmol/L)；(5)GIK+Wort(Wortmannin，2.0μg/kg/h,再灌注前5min開始，持續(xù)1h靜脈輸注)。之后取出頸外靜脈移植物行TUNEL凋亡染色和激活的caspase-3免疫組化染色，用Westernblot法檢測頸外靜脈移植物中caspase-3活性、A

4、kt和eNOS磷酸化水平。在另一組實驗中，雜種犬16只，隨機分為2組，每組8只，建立同樣模型，分別于移植靜脈再灌注前5分鐘直到之后4小時，給予以下2種液體以2mL/kg/h靜脈輸注：(1)生理鹽水；(2)GIK；之后分別給予生理鹽水0.5mL和胰島素4U(并按此分為兩組)，2次/日，皮下注射，連續(xù)1月，于術后29天，腹腔注射BrdU（50mg/kg），24小時后處死犬，取出靜脈移植物和正常頸外靜脈，分別行BrdU摻入和eNOS免疫組化染

5、色，用Westernblot法檢測其中α-平滑肌肌動蛋白表達狀況，用Verhoeff-vanGieson染色法衡量新生內膜增生程度。
　　實驗結果：
　　第一部分實驗：
　　1.術后短期內移植靜脈中存在ECs和VSMCs的大量凋亡；
　　2.GK處理可加重ECs和VSMCs的凋亡(與生理鹽水組比較，P<0.05)；
　　3.GIK可顯著降低I/R后移植靜脈ECs和VSMCs的凋亡指數(shù)（分別與生理鹽水組和GK

6、組比較，P<0.001）和中/內膜caspase-3的激活程度（分別與生理鹽水組和GK組比較，P<0.01）；
　　4.GK處理后明顯抑制移植靜脈中Akt和eNOS的磷酸化，并刺激caspase-3的活化（與生理鹽水組比較，P<0.05），GIK處理后則明顯增強了Akt和eNOS的磷酸化（分別與生理鹽水組和GK組比較，P<0.001），并明顯抑制caspase-3的活化（P<0.05）；加用Wortmannin后，GIK的這種效應

7、被明顯消除；
　　第二部分實驗：
　　1.在術后1月，應用胰島素可明顯促進犬移植靜脈中α-平滑肌肌動蛋白的表達（分別與犬正常頸外靜脈和生理鹽水組比較，P<0.001）；
　　2.應用胰島素后明顯抑制犬移植靜脈中/內膜的細胞增殖（細胞增殖指數(shù)11.15％±0.93％與生理鹽水組的25.55％±2.02％比較，P<0.001);
　　3.應用胰島素后明顯促進犬移植靜脈內膜eNOS的表達（分別與正常靜脈組和生理鹽水組比

8、較，P<0.05）；
　　4.胰島素應用可減輕移植靜脈新生內膜增生程度（中/內膜厚度136.51±8.97μm，與生理鹽水組的185.92±8.34μm比較,P<0.05）。
　　結論：
　　1.再灌注期間高血糖癥損傷自體移植靜脈，應用胰島素可有效保護自體移植靜脈；
　　2.胰島素保護自體移植靜脈的效應是通過PI3K-Akt信號轉導途徑抑制I/R后ECs和VSMCs凋亡來實現(xiàn)的；
　　3.術后短期內連續(xù)應用