VEGF-A對(duì)靜脈內(nèi)細(xì)胞分子標(biāo)記物EphB4表達(dá)的調(diào)控及其抑制移植靜脈內(nèi)膜增生的機(jī)制.pdf

1、第一章內(nèi)源性VEGF-A在移植靜脈適應(yīng)中對(duì)EphB4表達(dá)的調(diào)控
　　 目的:
　　 觀察自體靜脈移植后早期及晚期內(nèi)源性VEGF表達(dá)情況及其與靜脈分子標(biāo)志物EphB4表達(dá)的關(guān)系，初步探討VEGF對(duì)EphB4的調(diào)控及其抑制移植靜脈內(nèi)膜增生的機(jī)制。
　　 方法:
　　 建立大鼠自體頸靜脈移植重建頸總動(dòng)脈的模型，RT-PCT檢測(cè)術(shù)后6h，24h，72h，21d時(shí)VEGF mRNA及EphB4 mRNA的表達(dá)水平，

2、同時(shí)行形態(tài)學(xué)檢測(cè)，對(duì)比正常頸靜脈，術(shù)后21天移植靜脈血管壁各層厚度;以VEGF-A siRNA阻斷內(nèi)源性VEGF-A的產(chǎn)生，形態(tài)學(xué)檢測(cè)比較術(shù)后21天處理組與非處理組血管壁各層厚度，RT-PCR轉(zhuǎn)錄水平比較VEGF-A，EphB4表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 術(shù)后6h，VEGF-A即開始表達(dá)，同時(shí)EphB4表達(dá)開始減少;VEGF-A表達(dá)24h達(dá)峰后開始減少并逐漸恢復(fù)至基線，同時(shí)EphB4持續(xù)減少;術(shù)后21天，移植靜脈內(nèi)、中膜

3、厚度明顯增加;siRNA阻斷內(nèi)源性VEGF-A的產(chǎn)生后，EphB4表達(dá)較未處理的移植靜脈明顯減少且內(nèi)、中膜厚度明顯高于未處理組。
　　 結(jié)論:
　　 VEGF-A抑制內(nèi)膜增生的機(jī)制可能與靜脈分子標(biāo)志物EphB4的表達(dá)的減少有關(guān)，VEGF-A是否通過下調(diào)EphB4表達(dá)而實(shí)現(xiàn)抑制內(nèi)膜增生，需進(jìn)一步體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
　　 第二章外源性VEGF-A對(duì)體外培養(yǎng)靜脈內(nèi)皮細(xì)胞EphB4的表達(dá)調(diào)控
　　 目的:

4、r>　　 自體靜脈移植入動(dòng)脈血流環(huán)境中，其結(jié)構(gòu)功能將發(fā)生適應(yīng)性改變。其特點(diǎn)是促血管生成因子VEGF表達(dá)的增加及靜脈分子標(biāo)志物EphB4表達(dá)的消失。為進(jìn)一步探討VEGF是否是靜脈分子標(biāo)記物EphB4消失的上游因素，我們進(jìn)行了體外靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)，檢驗(yàn)VEGF-A是否調(diào)控EphB4表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制。方法及結(jié)果:
　　 以VEGF-A刺激小鼠肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞觀察EphB4表達(dá);分別用VEGF-R2阻斷劑，ERK1/2，Akt阻斷劑

5、預(yù)處理細(xì)胞，再以VEGF-A刺激細(xì)胞，RT-PCR方法檢測(cè)EphB4表達(dá)。結(jié)果顯示VEGF-A下調(diào)EphB4且上調(diào)ephrinB2，此效應(yīng)呈時(shí)間依賴性及劑量依賴性。VEGF-A對(duì)EphB4的抑制，通過VEGF-R2及其下游信號(hào)傳導(dǎo)通路ERK1/2發(fā)揮效應(yīng)。
　　 結(jié)論:
　　 VEGF-A下調(diào)成體靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Eph-B4的表達(dá)，此調(diào)節(jié)作用通過VEGF-R2—ERK1/2途徑實(shí)現(xiàn)。體外實(shí)驗(yàn)提示VEGF抑制移植靜脈內(nèi)膜增生可