Tp受體在小梁網(wǎng)細胞的信號傳導的研究.pdf

1、Tp受體激動后,小梁網(wǎng)中的平滑肌組織具體收縮機制及信號傳導尚不清楚.該課題以牛眼小梁網(wǎng)細胞為研究對象,鑒定小梁網(wǎng)Tp受體的存在,研究Ca<'2+>及PKC在小梁網(wǎng)的收縮中的信號傳導,并探討了其可能機制.闡明Tp受體在小梁網(wǎng)收縮中的作用,為抗青光眼藥物的開發(fā)提供一定的線索和實驗依據(jù).第一部分 牛小梁網(wǎng)細胞的體外培養(yǎng)及Tp受體的鑒定 方法:從牛眼上將小梁網(wǎng)分離下來,轉移至培養(yǎng)瓶內(nèi)進行培養(yǎng).待培養(yǎng)至第三至七代即可用于試驗.提取細胞的總RNA,

2、采用逆轉錄聚合酶鏈式反應(revese transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測細胞表面Tp受體mRNA的表達情況.第二部分 Tp受體對小梁網(wǎng)細胞內(nèi)鈣的影響 方法:將細胞懸液以Fura-2/AM負載,利用RF-5000熒光分光光度計進行細胞[Ca<,2+>]i測定,激發(fā)光波長分別為340nm和380nm;發(fā)射光波長為510nm.采樣間隔為1秒.根據(jù)文獻公式計算細胞[Ca<,2+>

3、]i.第三部分 PKC對細胞收縮的作用 方法:細胞總蛋白的提取,免疫印跡(immunoblotting or western blotting)檢測磷酸化PKC蛋白的水平.結論:1.該實驗證明了牛小梁網(wǎng)上存在Tp受體.2.TP受體激動后引起小梁網(wǎng)細胞內(nèi)Ca<'2+>的升高,該作用是通過胞內(nèi)Ca<'2+>釋放導致的.電壓依賴性Ca<'2+>通道(VDCC)不參與Ca<'2+>的內(nèi)流.3.TP受體激活,引起了PKC的磷酸化,并提示PKC也可