WNT信號(hào)傳導(dǎo)通路與基底細(xì)胞癌關(guān)系的研究.pdf

1、目的：基底細(xì)胞癌（basal cell carcinoma，BCC）又稱為基底細(xì)胞上皮瘤（basal cell epithelioma），是源自表皮或其附屬器的皮膚惡性腫瘤，為最常見的皮膚惡性腫瘤之一。本病多見于老年人，好發(fā)于皮膚曝光區(qū)，尤其是面、頸部，而軀干部相對(duì)少見。目前，其病因及發(fā)病機(jī)制尚不清楚，研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期日光曝曬、大劑量X線照射、接觸砷劑、人類乳頭瘤病毒感染、P53和PTCH基因突變等與其發(fā)生密切相關(guān)。由此可見，BCC的發(fā)生發(fā)

2、展是基因和環(huán)境兩方面因素共同作用的結(jié)果。近年來，WNT信號(hào)傳導(dǎo)通路與人類腫瘤的關(guān)系是國(guó)際前沿的一個(gè)研究熱點(diǎn)。WNT信號(hào)傳導(dǎo)通路，是一個(gè)多環(huán)節(jié)、多作用位點(diǎn)的生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控信號(hào)通路，在細(xì)胞內(nèi)外多種因素的調(diào)控下，WNT通路精確地調(diào)節(jié)著動(dòng)物的生長(zhǎng)和發(fā)育，而當(dāng)其影響因素發(fā)生變化使其活化過度或失調(diào)時(shí)，便會(huì)導(dǎo)致機(jī)體發(fā)育異?；蛐纬赡[瘤。WNT是一種細(xì)胞間分泌蛋白，通過與細(xì)胞膜上卷曲蛋白（Frizzled，F(xiàn)z）受體家族的成員作用，將信號(hào)傳至細(xì)胞內(nèi)，通過胞

3、質(zhì)蛋白的一系列相互作用，能夠使胞漿內(nèi)β-catenin保持穩(wěn)定并累積，進(jìn)而入核與T細(xì)胞因子/淋巴樣增強(qiáng)因子（T cell factor/lymphocyte enhancer factor，TCF/LEF）形成β-catenin-TCF/LEF轉(zhuǎn)錄復(fù)合體，并在有關(guān)輔助激活因子的協(xié)同作用下，最終激活WNT信號(hào)的下游靶基因從而誘發(fā)腫瘤。本實(shí)驗(yàn)旨在探討WNT信號(hào)傳導(dǎo)通路中的WNT1、β-catenin、TCF4等成分在BCC中的表達(dá)，從而進(jìn)一

4、步了解該通路在腫瘤發(fā)生過程中的轉(zhuǎn)導(dǎo)及調(diào)控，有助于為臨床診斷提供依據(jù)，為早期干預(yù)治療提供方法。
　　 方法：皮損標(biāo)本來源于2005年5月～2008年6月就診于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院皮膚科和病理科的患者，結(jié)合臨床表現(xiàn)、病理確診為BCC和脂溢性角化?。⊿K）。選取32例BCC標(biāo)本，其中男性20例，女性12例，年齡46～78歲，平均年齡53.36±7.95歲，病程1年～20年，平均5.45±1.89年。選取26例SK標(biāo)本作為對(duì)照組，其中男

5、性15例，女性11例，年齡38～71歲，平均43.35±6.12歲，其在年齡、性別上與BCC組患者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。并對(duì)來自外科外傷患者切除的15例正常皮膚標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。
　　 取患者皮損區(qū)組織做常規(guī)組織病理分析，常規(guī)組織病理采用蘇木精-伊紅（H&E）方法，皮損區(qū)WNT1、β-catenin、TCF4的表達(dá)情況應(yīng)用免疫組化鏈霉菌抗物素蛋白-過氧化物酶連接（SP）法，三個(gè)因子各自在BCC和SK中的表達(dá)結(jié)果分別采用兩等級(jí)資料比較的Man

6、n-WhitneyU秩和檢驗(yàn)，根據(jù)三個(gè)因子在BCC中的表達(dá)結(jié)果，分別對(duì)其兩兩之間采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析進(jìn)行分析，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　 結(jié)果：
　　 1組織病理檢查結(jié)果
　　 真皮內(nèi)可見大小不一、形態(tài)不等的瘤體，呈團(tuán)塊狀或條索狀。瘤體由基底樣細(xì)胞組成，細(xì)胞胞質(zhì)少，胞核較大呈圓形或長(zhǎng)梭形，瘤體邊緣的瘤細(xì)胞排列成柵欄狀，瘤體周圍基質(zhì)內(nèi)有明顯的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 2免疫組化

7、結(jié)果：陽(yáng)性染色為棕黃色顆粒
　　 2.1 WNT1的表達(dá)：WNT1陽(yáng)性為細(xì)胞胞膜著色，在BCC皮損中，陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于癌巢中，其中強(qiáng)陽(yáng)性20例，陽(yáng)性5例，弱陽(yáng)性3例，陰性4例。在26例SK皮損中，陽(yáng)性細(xì)胞主要集中于異常肥厚的棘細(xì)胞層，其中強(qiáng)陽(yáng)性2例，陽(yáng)性8例，弱陽(yáng)性7例，陰性9例。在正常皮膚中WNT1陽(yáng)性著色主要位于皮膚附屬器（毛囊），表皮基底層及棘細(xì)胞層則呈陰性表達(dá)；BCC組與SK組比較，表達(dá)強(qiáng)度明顯增高，差異有顯著性（Z=

8、-3.908，P<0.01）。
　　 2.2β-catenin的表達(dá)：在正常上皮細(xì)胞中，β-catenin陽(yáng)性細(xì)胞為胞膜著色，未見胞質(zhì)和/或胞核著色。在BCC及SK皮損中，可見β-catenin在細(xì)胞膜表達(dá)減弱或缺失，并出現(xiàn)不同程度的胞質(zhì)和/或胞核著色（即異位表達(dá)）。在32例BCC患者皮損中，28例出現(xiàn)β-catenin的異位表達(dá)，異位表達(dá)率為87.50％（28/32）。在26例SK患者皮損中，12例出現(xiàn)β-catenin異位表

9、達(dá)，異位表達(dá)率為46.15％（12/26），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，兩者有顯著性差異（Z=-4.343，P<0.01）。
　　 2.3 TCF4的表達(dá)：TCF4陽(yáng)性為細(xì)胞核著色，少數(shù)瘤細(xì)胞呈胞質(zhì)著色。在32例BCC皮損中可見強(qiáng)陽(yáng)性19例，陽(yáng)性8例，弱陽(yáng)性3例，陰性2例。在SK皮損及正常皮膚表皮全層均呈現(xiàn)陰性表達(dá)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，BCC組與SK組比較，兩者有顯著性差異（Z=-6.615，P<0.01）。
　　 2.4 WNT1

10、、β-catenin、TCF4表達(dá)的相關(guān)性分析：在BCC患者皮損中三者的表達(dá)強(qiáng)弱程度經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析結(jié)果顯示；WNT1和β-catenin呈正相關(guān)；β-catenin和TCF4呈正相關(guān)；WNT1和TCF4呈正相關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 1 WNT1的表達(dá)水平在BCC患者皮損中明顯高于對(duì)照組，提示W(wǎng)NT1表達(dá)水平上調(diào)可能參與了BCC的發(fā)生及發(fā)展。
　　 2β-catenin的異位表達(dá)率在BCC患者皮損

11、中明顯高于對(duì)照組，推測(cè)β-catenin的異位表達(dá)可能啟動(dòng)了下游的靶基因，使其激活，細(xì)胞周期發(fā)生變化，干擾了正常的細(xì)胞增殖和分化，誘發(fā)BCC的發(fā)生。
　　 3 TCF4的表達(dá)水平在BCC患者皮損中顯著高于對(duì)照組，推測(cè)異位的信號(hào)可能激活了下游的癌基因，提示TCF4的高度表達(dá)可能與BCC的發(fā)病有關(guān)。
　　 4 BCC患者皮損中對(duì)WNT1、β-catenin、TCF4兩兩之間的相關(guān)性分析結(jié)果可推測(cè)：WNT1的高表達(dá)可能誘導(dǎo)WN