低氧啟動子調(diào)控下VEGF-,165-基因修飾的EPCs誘導(dǎo)大鼠急性心肌梗死后血管新生.pdf

1、目的：
　　 目前的研究發(fā)現(xiàn)外源性VEGF165基因可以促進缺血組織血管新生，而多拷貝缺氧反應(yīng)元件（Hypoxic Response Element，HRE）可以對VEGF165基因的表達進行調(diào)控減少其副作用；此外，多種形式的干/祖細胞也可以改善缺血組織的功能；然而多拷貝HRE調(diào)控VEGF165基因修飾的干細胞對缺血心肌中治療性血管新生的作用目前仍不清楚。本研究通過把6HRE調(diào)控的VEGF165基因轉(zhuǎn)染入內(nèi)皮祖細胞中，來研究這種

2、新的基因修飾的內(nèi)皮祖細胞對心肌梗死后缺血心肌中血管發(fā)生以及對心肌梗死后心臟功能的治療作用。
　　 方法：
　　 首先用分子生物學(xué)技術(shù)成功構(gòu)建r6HRE-CMV-VEGF165重組質(zhì)粒和rCMV-VEGF165重組質(zhì)粒，并對體外分離培養(yǎng)的大鼠骨髓來源內(nèi)皮祖細胞（Endothelial Progenitor Cells，EPCs）進行免疫熒光法鑒定；然后用陽離子脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到EPCs中，并構(gòu)建體外細胞缺氧模型鑒定低

3、氧啟動子的調(diào)控作用；隨后把基因修飾的EPCs通過尾靜脈注射法移植入成功建立的急性心肌梗死（Acute MyocardialInfraction，AMI）模型的Sprague-Dawley（SD）大鼠中，通過RT-PCR和Western1blot法檢測AMI后1w缺血心肌中VEGF165 mRNA和蛋白質(zhì)的表達水平，用免疫組化法和超聲心動圖檢測AMI4w后大鼠缺血心肌中毛細血管密度和心臟功能。
　　 結(jié)果：
　　 1）陽離

4、子脂質(zhì)體法可有效的將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入體外分離培養(yǎng)的骨髓來源大鼠EPCs；
　　 2）6HRE-CMV低氧啟動子誘導(dǎo)VEGF165基因在體內(nèi)外缺氧時表達增強，而非缺氧下僅呈現(xiàn)低水平表達；
　　 3）r6HRE-CMV-VEGF165質(zhì)粒轉(zhuǎn)染EPCs移植組中大鼠AMI后1wVEGF165基因的表達水平以及4w缺血心肌中毛細血管密度明顯高于rCMV-VEGF165質(zhì)粒轉(zhuǎn)染EPCs移植組和EPCs移植組（P<0.05）；