心肌梗死患者SIRT1基因啟動(dòng)子基因分析及功能測(cè)定.pdf

1、背景：冠心病(CAD)是一種主要由冠狀動(dòng)脈血管壁粥樣硬化所引起，由遺傳和環(huán)境因素及兩者之間相互作用引起的多基因疾病，而心肌梗死是冠心病的一種限制性表型，包括ST抬高型心肌梗死、非ST抬高型心肌梗死。目前，國(guó)內(nèi)外通過(guò)對(duì)候選基因、連鎖分析、全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)等確定與心肌梗死相關(guān)聯(lián)的基因及基因位點(diǎn)有十多個(gè)，但是其在心肌梗死中遺傳因素及致病的分子機(jī)制仍不清楚。SIRT1是一種依賴NAD+的組蛋白去乙?；福瑓⑴c了體內(nèi)許多生理功能的調(diào)節(jié)

2、，包括眾多基因轉(zhuǎn)錄、能量代謝、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激以及細(xì)胞衰老過(guò)程的調(diào)節(jié)等，尤其在糖代謝、脂代謝、調(diào)節(jié)胰島素分泌中發(fā)揮著重要的作用。SIRT1還可以通過(guò)去乙?；允上嚓P(guān)蛋白(ATG)和叉頭框蛋白轉(zhuǎn)錄因子(FOXOs)誘導(dǎo)自噬，在心肌梗死病人中發(fā)現(xiàn)自噬減少。此外，SIRT1也參與調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮和動(dòng)脈粥樣硬化的形成。因此，我們假設(shè)SIRT1可能參與心肌梗死的發(fā)病。
　　 目的：⑴通過(guò)對(duì)心肌梗死病人進(jìn)行SIRT1基因啟動(dòng)子的遺傳學(xué)分析，明

3、確SIRT1基因啟動(dòng)子基因變異與心肌梗死的關(guān)系。⑵通過(guò)熒光素酶報(bào)告基因載體系列pGL3測(cè)定SIRT1功能，檢測(cè)其功能變化，為進(jìn)一步從基因水平預(yù)測(cè)心肌梗死的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并作為預(yù)防和治療靶位點(diǎn)提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：①PCR法擴(kuò)增SIRT1基因啟動(dòng)子DNA序列，測(cè)序后分析各組SIRT1基因啟動(dòng)子序列變化情況。②應(yīng)用pMDR19-T載體擴(kuò)增SIRT1突變基因，將SIRT1突變基因插入到pGL3-Basic載體，同pRL-TK載體共轉(zhuǎn)

4、染HEK-293細(xì)胞，分別測(cè)螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶的量，計(jì)算其比值，觀察SIRT1基因功能變化。
　　 結(jié)果：⑴基因分析發(fā)現(xiàn)六個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SNPs)和14 DNA序列變異被確定。其中，五種異常雜合變異體(g.69643743Ins，g.69643840Ins，g.69643903G＞C，g.69644235G＞C and g.69644353G＞T)在五個(gè)MI患者中被發(fā)現(xiàn)，但是在對(duì)照組沒(méi)有異常。此外，在三個(gè)MI患者發(fā)

5、現(xiàn)一個(gè)SNP(g.69643707A＞C，rs35706870)，但在對(duì)照組中沒(méi)有。與此相反，五個(gè)異常雜合變異體(g.69643672G＞A，g.69644226C＞T，g.69644278A＞G，g.69644408G＞A and g.69644408G＞T)只在對(duì)照組中被確認(rèn)。其余的單核苷酸多態(tài)性和序列變異在MI患者和對(duì)照組中均被發(fā)現(xiàn)，其頻率相似。⑵心肌梗死患者中SIRT1突變基因功能與正常人比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，而