FasL的制備及其誘導EAE淋巴細胞凋亡的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、為了闡明Fas-FasL在MS中介導自身反應性T細胞的刪除機理,我們進行了下列三部分實驗.主要內容和結果如下:第一部分,膜FasL的純化及其凋亡誘導功能的鑒定;我們應用親和層析柱,從表達FasL的HepG2細胞膜蛋白抽提液中分離純化FasL分子.實驗證明用本法純化的FasL分子量為31~33kD,SDS-PAGE呈現單一條帶,Western-Blot表明所提取的膜蛋白為人FasL.細胞學檢測該蛋白能誘導表達Fas的細胞發(fā)生凋亡,并且在一

2、定濃度范圍內呈現量-效關系.第二部分,FasL胞外區(qū)(sFasL)基因的原核表達及其產物的免疫活性測定;我們將FasL胞外區(qū)編碼基因克隆入表達載體pQE-31,轉化大腸桿菌DH5α,經大量培養(yǎng),IPTG誘導表達,沉淀被裂解后,再經Ni-NAT親和層析,制備了純度較高的sFasL蛋白,SDS-PAGE電泳顯示了在20kD處有一單一條帶,經Western-Blotting鑒定,能與抗FasL抗體結合.隨后我們再用PIERCE公司的內毒素去除

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