FasL維持椎間盤免疫豁免及誘導(dǎo)髓核細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：①觀察采用18G皮膚穿刺針穿刺纖維環(huán)，誘導(dǎo)兔椎間盤退變建立動(dòng)物模型。②了解生理學(xué)屏障與FasL的分子生物學(xué)效應(yīng)之間的聯(lián)系，探討椎間盤退變的發(fā)病機(jī)制。③了解FasL目的基因在正常人椎間盤及椎間盤突出癥患者椎間盤組織中的表達(dá)情況。 方法：⑴新西蘭大白兔24只，用持針器夾持18G皮膚穿刺針從左前外側(cè)刺入L3/4、L4/5、L5/6椎間盤的纖維環(huán)，深度控制在5mm。術(shù)前及術(shù)后3、6、10周對(duì)造模后的椎間盤及正常的椎間盤（L2/3）

2、行MRI掃描，并在術(shù)后3、6、10周對(duì)其行免疫組化及組織學(xué)觀察。⑵采用18規(guī)格的皮膚穿刺針穿刺家兔纖維環(huán)，在術(shù)后的3、6、10周收集正常及穿刺后的椎間盤組織，免疫組織化學(xué)染色觀察Fas與FasL的表達(dá)，流式細(xì)胞技術(shù)分析髓核細(xì)胞凋亡指數(shù)。⑶收集16例腰椎間盤突出癥患者的椎間盤組織（破裂型與非破裂型各8例）及4例正常人椎間盤組織，通過RT—PCR技術(shù)觀察FasL，F(xiàn)as，TNF and IL目的基因的表達(dá)情況，并比較其表達(dá)程度。 結(jié)

3、果：①M(fèi)RI結(jié)果提示，從術(shù)后第3周到第10周，造模后的椎間盤T2WI信號(hào)呈現(xiàn)持續(xù)減弱趨勢，免疫組化及組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)髓核細(xì)胞的數(shù)量及Ⅱ型膠原含量進(jìn)行性減少（p<0．01）。②正常髓核組織中可見少許髓核細(xì)胞胞漿中FasL呈弱陽性染色，實(shí)驗(yàn)組髓核細(xì)胞胞漿則呈強(qiáng)陽性染色。FasL陽性細(xì)胞百分比在正常組與各實(shí)驗(yàn)組之間的差異具有非常顯著性差異（P<0．001，兩兩比較）。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的髓核細(xì)胞平均凋亡指數(shù)明顯高于正常組（P<0．001，0．002 a

4、nd0．006，兩兩比較）。實(shí)驗(yàn)組髓核細(xì)胞FasL陽性表達(dá)百分比與Fas陽性表達(dá)百分比之間具有顯著相關(guān)性（r=0．571，P=0．0036）。③正常髓核組織中僅有FasL的表達(dá)，突出的椎間盤組織中存在FasL，F(xiàn)as，TNF and IL的表達(dá)，而且表達(dá)指數(shù)在破裂型組與非破裂型組之間具有顯著性差異（P<0．05）。 結(jié)論：⑴纖維環(huán)穿刺法可以誘導(dǎo)兔椎間盤的緩慢退變，這一模型為研究椎間盤退變提供了有效的載體。⑵FasL與生理學(xué)屏障的