AG490對人未成熟樹突狀細胞誘導初始性CD4+T細胞分化為Treg細胞影響的體外研究.pdf

1、目的:
　　利用人外周血獲得未成熟樹突狀細胞,通過AG490對人未成熟樹突狀細胞誘導CD4+T細胞分化為CD4+CD25+T細胞轉化率影響的體外研究,確定JAK-STAT信號傳導通路其對CD4+T細胞轉化為調節(jié)性T細胞的影響,研究人imDC誘導移植免疫耐受機制。
　　方法:
　　抽取一個健康成人肘靜脈血50ml,用梯度密度離心法從血液標本中分離單個核細胞(PBMC),在37℃、5％CO2的條件下,10%FCS RPMI

2、-1640完全培養(yǎng)液培養(yǎng),加入GM-CSF(100ng/ml)和IL-4(50ng/ml)誘導,每3d半量換液1次,培養(yǎng)7天后收集疏松貼壁細胞。未成熟樹突狀細胞的鑒定:
　　1)在光鏡下和倒置相差顯微鏡下進行形態(tài)學觀察;
　　2)利用流式細胞術檢測細胞的表面分子標志;
　　3)細胞功能測定。免疫磁珠分選法從另一個體臍血中分離CD4+T細胞,均分為5組細胞:
　　(1)空白組:CD4+T細胞加入等容量RPMI-16

3、40單獨培養(yǎng);
　　(2)混合對照組:imDC與CD4+T細胞以1:10的濃度比例混合培養(yǎng),不加其他試劑,誘導Treg;
　　(3)低濃度AG490組:imDC與CD4+T細胞以1:10的濃度比例混合培養(yǎng)同時加入終濃度為10μg/mL AG490;
　　(4)中濃度 AG490組:imDC與CD4+T細胞以1:10的濃度比例混合培養(yǎng)同時加入終濃度為30μg/mL AG490;
　　(5)高濃度AG490組:imD

4、C與CD4+T細胞以1:10的濃度比例混合培養(yǎng)同時加入終濃度為50μg/mL AG490。再進行混合培養(yǎng)5天,以流式細胞儀檢測CD4+CD25+T細胞轉化率。
　　結果:
　　(1)imDC的鑒定:在形態(tài)學方面,培養(yǎng)至第7天的單個核細胞懸浮生長,表面可見毛刺狀突起,體積較前增大。
　　(2)FCM檢測Treg細胞的轉化率:imDC與CD4+混合培養(yǎng)后, FCM檢測Treg細胞的轉化率,結果如下:空白組的Treg細胞轉化

5、率為1.74±0.18%,混合對照組的Treg細胞轉化率為22.23±0.77%,而低濃度 AG490組為22.31±0.82%,中濃度 AG490組為41.39±1.87%,高濃度AG490組為42.32±1.18%。低濃度AG490組與混合對照組之間無顯著性差異(P值>0.05),中濃度AG490組和高濃度AG490組之間也無顯著性差異(P值>0.05),其余各組之間兩兩比較均有顯著性差異(P值<0.05)。
　　結語: