蝎毒對(duì)體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞（SMMC 7721）和Hela細(xì)胞株的抗腫瘤作用研究及機(jī)制探討.pdf

1、惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類生命安全的疾病之一。尋求高效低毒的抗腫瘤藥物及治療方法一直是科學(xué)界研究的熱點(diǎn)。蝎毒是一種生物毒素，因其具有廣泛的生理學(xué)效應(yīng)而倍受關(guān)注。本文旨在研究蝎毒對(duì)體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞(SMMC 7721)以及Hela細(xì)胞株的殺傷作用，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行探討，將為抗腫瘤藥物的開發(fā)及蝎毒抗腫瘤的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 目的：檢測(cè)蝎毒粗毒及其部分純化組分對(duì)人肝癌細(xì)胞(SMMC 7721)以及Hela細(xì)胞株生長(zhǎng)的抑制作用；對(duì)

2、兩種細(xì)胞株凋亡相關(guān)蛋白進(jìn)行檢測(cè)，以探討蝎毒對(duì)其作用機(jī)制；驗(yàn)證兩種腫瘤細(xì)胞對(duì)于蝎毒的敏感性。 方法：分別用蝎毒粗毒以及蝎毒部分純化組分按照濃度梯度對(duì)人肝癌細(xì)胞(SMMC 7721)以及Hela細(xì)胞作用24小時(shí)，然后用MTT法檢測(cè)兩種腫瘤細(xì)胞對(duì)蝎毒粗毒以及部分純化組分的存活率；分別用Western Blotting以及免疫細(xì)胞化學(xué)的方法檢測(cè)caspase-3以及bcl-2兩種凋亡相關(guān)蛋白在蛋白水平的表達(dá)量。Western Blott

3、ing以Actin作為內(nèi)參。用免疫熒光的方法驗(yàn)證兩種腫瘤細(xì)胞對(duì)于蝎毒的敏感性。 結(jié)果： 1.MTT結(jié)果： (1.1)經(jīng)蝎毒粗毒處理24小時(shí)，粗毒組人肝癌細(xì)胞(SMMC 7721)的存活率明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，并隨著蝎毒粗毒濃度增大(0.28、0.70、1.4、2.8及5.6μg/ml)，作用時(shí)間延長(zhǎng)(4h、8h、12h、24h)，肝癌細(xì)胞存活率逐漸降低，呈梯度變化。 (1.2)經(jīng)蝎毒部分純化組分

4、處理24小時(shí)，純化組人肝癌細(xì)胞(SMMC 7721)的存活率明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，并隨著蝎毒濃度增大(0.28、0.70、1.4、2.8及5.6μg/ml)，作用時(shí)間延長(zhǎng)(4h、8h、12h、24h)，肝癌細(xì)胞存活率逐漸降低，呈梯度變化。 (1．3)蝎毒部分純化組分對(duì)于人肝癌細(xì)胞(SMMC 7721)的殺傷作用稍弱于粗毒組。 (2．1)經(jīng)蝎毒粗毒處理24小時(shí)，粗毒組Hela細(xì)胞的存活率在蝎毒濃度為0．28、0．

5、70、1.4μg／ml時(shí)，與對(duì)照組無(wú)明顯差異；在蝎毒濃度為2．8及5．6μg／ml時(shí)，低于對(duì)照組(P<0．05)，并隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)(4h、8h、12h、24h)，在8小時(shí)后逐漸降低，呈梯度變化。 (2．2)經(jīng)蝎毒部分純化組分(濃度為0．28、0．70、1．4、2．8及5．6μg/ml)處理的Hela細(xì)胞的存活率在24小時(shí)內(nèi)，與對(duì)照組無(wú)明顯差異。 (2．3)Hela細(xì)胞對(duì)于蝎毒粗毒及其部分純化產(chǎn)物的敏感性低于人肝癌細(xì)胞(

6、SMMC 7721)。 2.Western blotting結(jié)果： 經(jīng)過(guò)2．8μg／ml蝎毒粗毒處理4小時(shí)的人肝癌細(xì)胞(SMMC 7721)，促凋亡蛋白caspase-3的蛋白表達(dá)量增加；抑制凋亡蛋白bcl-2的蛋白表達(dá)量減少。 3.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果： 經(jīng)過(guò)2．8μg/ml蝎毒粗毒處理8小時(shí)的Hela細(xì)胞，促凋亡蛋白caspase-3的蛋白表達(dá)量增加；抑制凋亡蛋白bcl-2的蛋白表達(dá)量減少。 4

7、免疫熒光結(jié)果： 經(jīng)過(guò)標(biāo)記熒光的蝎毒粗毒處理8小時(shí)的人肝癌細(xì)胞(SMMC 7721)以及Hela細(xì)胞，熒光顯微鏡下可見(jiàn)，人肝癌細(xì)胞(SMMC 7721)結(jié)合的熒光物質(zhì)多于Hela細(xì)胞。 結(jié)論： 1．蝎毒粗毒及其部分純化組分對(duì)人肝癌細(xì)胞(SMMC 7721)的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用。24小時(shí)內(nèi)，隨著蝎毒濃度增大(0．28、0．70、1．4、2：8及5．6μg／ml)，作用時(shí)間延長(zhǎng)(4h、8h、12h、24h)，存活率