毛細(xì)管電泳在藥物篩選中的應(yīng)用和技術(shù)開發(fā).pdf

1、毛細(xì)管電泳是一種高效、快速、微量的分離分析技術(shù)，在生物分析領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。本文利用毛細(xì)管電泳的技術(shù)特點(diǎn)將其應(yīng)用于藥物篩選中，針對藥物活性篩選中的關(guān)鍵技術(shù)問題，如高效快速的篩選方法和新藥物靶點(diǎn)尋找，進(jìn)行了一系列的新探索。
　　 首先，藥物活性篩選新方法的開發(fā)。對化合物進(jìn)行活性篩選，主要是研究化合物與藥物靶點(diǎn)的相互作用。親和毛細(xì)管電泳是研究分子間相互作用的常用方法，以待測樣品的有效電泳淌度為參數(shù)計算分子間的結(jié)合常數(shù)。淌度的準(zhǔn)確測定是該

2、方法的重要前提，但是由于受到溫度變化、電滲流波動等因素的影響，重現(xiàn)性較差，限制了其發(fā)展。本文在上述技術(shù)的基礎(chǔ)上，開發(fā)了一種壓力驅(qū)動的親和毛細(xì)管電泳方法，通過將氣壓推動過程和電泳過程相結(jié)合，有效的避免了因素的干擾，分析時間也大大縮短。采用該方法研究了8種具有不同pKa值、不同結(jié)合能力的藥物與牛血清白蛋白之間的結(jié)合情況，并計算了結(jié)合常數(shù)值。通過與傳統(tǒng)的熒光分光光度法的測定結(jié)果比較，驗(yàn)證了該方法的可行性和準(zhǔn)確性。同時，明確了該方法適用于研究結(jié)

3、合較弱的反應(yīng)體系。
　　 其次，藥物結(jié)構(gòu)篩選模型的建立?；钚院Y選是目前常用的篩選方法，但是因篩選指標(biāo)單一，篩選結(jié)果具有誤導(dǎo)性，單純的增加篩選數(shù)量難以找到有活性又未知的化合物，因此篩選成本高，效率低。為此，本文探索了一種全新的結(jié)構(gòu)篩選方法，以抗原特殊結(jié)構(gòu)為核心，利用抗原和抗體特異性識別能力，篩選具有抗原類似結(jié)構(gòu)的化合物。以抗真菌藥物棘球白素B的母核和其多克隆抗體為樣品，采用毛細(xì)管電泳配體分離法和激光誘導(dǎo)熒光檢測技術(shù)，通過研究二者的

4、結(jié)合行為，初步建立了以抗原有效電泳淌度變化為判斷依據(jù)的結(jié)構(gòu)篩選模型。該模型旨在用于篩選具有潛在抗真菌活性的化合物。
　　 最后，藥物靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)方面的應(yīng)用。差異蛋白質(zhì)組學(xué)是發(fā)現(xiàn)藥物作用靶點(diǎn)的重要方法，二維凝膠電泳和質(zhì)譜是分離和鑒定蛋白質(zhì)的核心技術(shù)。經(jīng)二維凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)，在進(jìn)入質(zhì)譜之前需要長時間、繁瑣的樣品處理過程，難以滿足自動化的需要。針對該問題，本文在前人工作的基礎(chǔ)上，開發(fā)出一種集凝膠中蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移和在線酶解的毛細(xì)管電泳方法。