中藥提取物的活性篩選和“一測多評”技術在中藥中的應用.pdf

1、本文從以下兩方面進行了闡述。
　　一、中藥提取物的活性篩選。
　　本研究選取衛(wèi)生部2002年2月28日下發(fā)的《既是食品又是藥品的物品名單》及《可用于保健食品的物品名單》中的21種中藥，分別用水/醇提取制備了22個提取物進行5個方面的活性篩選，以期尋找到具有抗老年性癡呆、降糖及降脂作用的中藥。實驗中采用酶活性測定法，測定乙酰膽堿酯酶、A-beta.積聚、hIAPP積聚、α-葡萄糖苷酶及脂肪酶等抑制效力的方法，分別以毒扁豆堿、姜

2、黃素、阿卡波糖、奧利司他為陽性對照。實驗結果顯示，淫羊藿提取物下顯示出較強的乙酰膽堿酯酶抑制作用，其抑制率為41.34％(毒扁豆堿抑制率為100％)；淫羊藿、香附、天麻、紅景天及金櫻子藥材提取物顯示出了較強A-beta積聚抑制作用，其活性抑制率分別為52.63％、62.58％、50.70％、46.86％、48.36％(姜黃素抑制率為66.78％)；絞股藍提取物顯示出一定的hlAPP積聚的抑制活性，抑制率為47.41％(姜黃素抑制率為70

3、.82％)；蒲黃、菟絲子、山藥、香附、紅景天及刺五加提取物顯示出一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其抑制率分別為27.57％、31.34％、28.17％、26.72％、26.98％、29.40％(阿卡波糖抑制率為69.76％)；香附、紅景天提取物還顯示出一定的脂肪酶抑制活性，抑制率分別為40.74％和60.63％(奧利司他抑制率為95.45％)。本實驗為進一步發(fā)現(xiàn)中藥中新的乙酰膽堿酯酶抑制劑、A-beta積聚抑制劑、hIAPP積聚抑制劑、α

4、-葡萄糖苷酶抑制劑及脂肪酶抑制劑積累了數(shù)據，并為開發(fā)具有抗老年性癡呆、降糖及降脂等作用的保健品及藥品提供了參考。
　　二、“一測多評”技術在中藥中的應用。
　　中藥多成分、多功效的作用特點使得單指標的質量控制難以全面反映中藥的內在質量，多成分同步質量控制勢在必行。在實際工作中，多成分同步質量控制需要提供足量的對照品；而中藥對照品的難以分離或化學單體不穩(wěn)定導致對照品的供應量不足，使得單一成分的質量控制尚存在一定的難度，多指標的

5、質量控制更是受到限制?！耙粶y多評”技術的提出為解決這類問題提供了一個新的思路。目前“一測多評”技術已在黃連、丹參、吳茱萸等20多味常用中藥材的應用中得到驗證，其中黃連的“一測多評”方法已被2010年版《中國藥典》收錄。
　　1、“一測多評”技術在淫羊藿及復方制劑中的應用。
　　首先，以淫羊藿藥材中淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及寶藿苷-I為指標，建立淫羊藿藥材中上述5個黃酮類成分的HPLC同步測定方法。采用C18色譜

6、柱，以乙腈-0.2％磷酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，流速1.0 mL·min-1，檢測波長270 nm，柱溫35℃。在此條件下，5種成分的分離度良好。在以下線性范圍內0.000784～0.392μg，0.000844～0.422μg，0.000804～0.402μg，0.000784～0.392μg，0.000820～0.410μg，線性關系良好，相關系數(shù)均大于0.9999。其加樣回收率為98.69％～101.7％，RSD為1.8％～2

7、.5％，表明該方法的準確度良好。其次，建立了朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及寶藿苷-I與內參物淫羊藿苷間的相對校正因子和采用相對保留值對待測成分進行定位的方法，分別為：f270nm朝羊藿A/淫羊藿苷=0.73，f270nm朝羊藿B/淫羊藿苷=0.80，f270nm朝羊藿定c/淫羊藿苷=0.81，f270nm寶藿苷-I/淫羊藿苷=1.37和γ朝藿定A/淫羊藿苷=0.69，γ朝藿定B/淫羊藿苷=0.78，γ朝藿定C/淫羊藿苷=0.90，γ寶藿

8、苷-I/淫羊藿苷=1.71。同時對相對校正因子的耐用性做了考察，重點考察了不同儀器、不同色譜柱、流速、柱溫、修飾劑等因素的微小變化對相對校正因子的影響。結果表明，在對色譜條件進行微調的情況下，相對校正因子的重現(xiàn)性和耐用性良好(RSD<5％)。最后，分別采用外標法和“一測多評”法測定19批淫羊藿藥材及20批炙淫羊藿中5種黃酮類成分的含量，采用相對誤差法對測定結果進行評價。結果表明，“一測多評”法的測定結果與外標法的測定結果無顯著差異，相對

9、誤差均<5％。說明在缺乏對照品的情況下，“一測多評”技術可以應用于淫羊藿藥材及炙淫羊藿的多指標質量控制。
　　在測定的19批藥材和20批炙淫羊藿中，5種黃酮類成分含量的差異較大，即使是同一產地的藥材，其含量也有較大差異。19批藥材中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷及寶藿苷.I的平均含量分別為0.91±0.30，1.21±0.47，3.72±3.85，1.85±0.91，0.62±0.40 mg·g-1；20批炙淫羊藿中上述5

10、種黃酮類成分的平均含量分別為：0.86±0.39，1.13±0.56，1.42±1.34，1.97±1.07，0.63±0.35 mg·g-1。從平均值看，淫羊藿藥材中的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的含量略高于炙淫羊藿中的含量，淫羊藿苷的含量略低于炙淫羊藿中的含量，而寶藿苷的含量二者基本相當。
　　將建立的淫羊藿黃酮“一測多評”質量評價模式直接應用于中成藥抗骨增生膠囊的質量評價，以朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷及寶藿苷-I作為檢測指

11、標，方法學考察結果，其精密度、穩(wěn)定性、重復性、加樣回收率均符合中藥質量分析的要求。試驗中采用外標法(ESM)和一測多評法(QAMS)對9批抗骨增生膠囊中上述4個黃酮類成分的含量進行了測定，并用相對誤差法對測定結果進行評價。結果顯示，2種方法的測定結果無顯著性差異，相對誤差小于5％。結果表明，淫羊藿黃酮類成分的QAMS質量評價模式在中成藥抗骨增生膠囊多成分同步質量評價中的適應性良好。在色譜條件滿足中藥質量分析要求的前提下，該模式可直接用于

12、含淫羊藿制劑中黃酮類成分的質量控制。
　　2、“一測多評”技術在新清寧片中的應用。
　　將文獻報道的大黃蒽醌類成分的“一測多評”質量評價模式直接應用于中藥制劑新清寧片的質量評價，僅采用大黃素單一對照品實現(xiàn)了對新清寧片中典型成分大黃素、大黃酸、大黃酚及大黃素甲醚等4個大黃蒽醌類成分的同步測定。通過與ESM所得結果的比較，發(fā)現(xiàn)QAMS的計算值與外標法的實測值之間無顯著性差異，相對誤差小于5％，表明文獻報道的大黃蒽醌類成分間的相對