中藥提取物中毒蕈膽堿M1受體激動劑的高通量篩選.pdf

1、阿爾茨海默病是發(fā)病率很高的一種老年性疾病，其特征是膽堿能系統(tǒng)的功能性損傷和腦內(nèi)淀粉斑的形成，造成的記憶衰退和智力下降。毒蕈膽堿M1受體和阿爾茨海默病有著密切的聯(lián)系，其激活能有效的改善膽堿能系統(tǒng)活性和抑制腦內(nèi)淀粉斑的形成，是治療和減緩該病的有效途徑。目前，用于治療該病的M1受體激動劑選擇性不高，給病人造成許多副作用，影響治療。因此，篩選新型的M1受體的選擇性激動劑，開發(fā)出治療阿爾茨海默病的新藥，是目前新藥開發(fā)的一個研究重點。 傳統(tǒng)

2、的動物篩選模式勞動強度大，效率低。隨著分子生物學、分子藥理學、自動化技術(shù)、檢測技術(shù)的進步與結(jié)合，高通量藥物篩選(Highthroughputscreening，HTS)技術(shù)利用分子或細胞水平的藥靶進行微量篩選，極大的提高了藥物篩選的效率和準確性，是新藥篩選的一個有效手段。本文應(yīng)用重組基因技術(shù)，建立了一個適用于高通量藥物篩選的M1受體激動劑的篩選模型，并利用該模型對400種中藥水提物進行了小規(guī)模篩選，尋找M1受體激動劑。 本文所建

3、立的篩選模型將M1受體與報告基因相偶聯(lián)，即將M1受體基因和報告基因共同轉(zhuǎn)染到HEK293細胞株中，建立一個穩(wěn)定表達的M1受體細胞株，用以篩選M1受體激動劑。當化合物與膜表面的M1受體結(jié)合后，激活M1受體對應(yīng)的信號級聯(lián)反應(yīng)，改變胞內(nèi)第二信使的表達水平，響應(yīng)元件響應(yīng)該變化，促進報告基因的表達，通過檢測在細胞溶質(zhì)中報告基因的量，間接評估化合物的生物活性。 應(yīng)用該篩選模型，對400種中藥水提物進行了小規(guī)模篩選，發(fā)現(xiàn)了3種對M1受體有生物