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1、目的:通過(guò)觀察胰高血糖素樣肽-1(GLP-1) 受體激動(dòng)劑艾塞那肽(Exendin-4)干預(yù)高糖高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)的糖耐量減低(IGT)大鼠胰島β細(xì)胞數(shù)量、分泌功能的變化,探討胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑對(duì)IGT大鼠胰島β細(xì)胞的保護(hù)作用及對(duì)血糖等臨床基本特征的影響。
方法:96只4~5周齡(150g~180g) 清潔級(jí)雄性Wistar大鼠,購(gòu)于山西省中醫(yī)研究所。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后(5只/籠),隨機(jī)分為常規(guī)飼料喂養(yǎng)組(n=24)和高
2、糖高脂飲食喂養(yǎng)組(n=72),其中常規(guī)飼料喂養(yǎng)組給予常規(guī)飼料(13.4kJ/g,其中脂肪提供熱量占10.2%,蛋白質(zhì)占23.3%,碳水化合物占66.5%);高糖高脂飲食喂養(yǎng)組給予高糖高脂飼料(21.8kJ/g,其中脂肪提供熱量占56.0%,蛋白質(zhì)占7.0%,碳水化合物占37.0%)。均自由飲水,室溫控制在18~22°C,相對(duì)濕度30%~70%。兩組大鼠每日早晚各投食一次,每日每只大鼠的投食量為其體重的3%。12周時(shí),做口服葡萄糖耐量(O
3、GTT)試驗(yàn):禁食12-14h后,鼠尾采血用快速血糖儀測(cè)空腹血糖(FBG),以50%葡萄糖注射液2g/kg 體重灌胃,2h后再次鼠尾采血測(cè)OGTT 2h 血糖(2hPG)。以3.9mmol/L≤FBG<6.1mmol/L, 7.8mmol/L≤2hPG<
11.1mmol/L 并持續(xù)一周以上為造模成功。常規(guī)飼料喂養(yǎng)組24只血糖均正常,全部納入正常糖耐量對(duì)照組(NGT組,n=24),繼續(xù)給予常規(guī)飼料喂養(yǎng),自由飲水;高糖高脂飲
4、食喂養(yǎng)組成模62只,隨機(jī)分為糖耐量減低組、Low-Exendin4組、High-Exendin4組,繼續(xù)給予高糖高脂喂養(yǎng),自由飲水。所有大鼠從成模后開(kāi)始計(jì)時(shí),分別分為0、4、8周組。正常糖耐量對(duì)照組隨機(jī)分為正常對(duì)照0周組(N0W組,n=8)、4周組(N4W組,n=8)、8周組(N8W組,n=8);糖耐量減低組隨機(jī)分為糖耐量減低0周組(IGT0W組,n=6)、4周組(IGT4W組,n=7)、8周組(IGT8W組,n=7);Low-Exen
5、din4組隨機(jī)分為L(zhǎng)ow-Exendin4-0周組(L-Ex0W組,n=7)、4周組(L-Ex4W組,n=7)、8周組(L-Ex8W組,n=7);High-Exendin4組隨機(jī)分為High-Exendin4-0周組(H-Ex0W組,n=7)、4周組(H-Ex4W組,n=7)、8周組(H-Ex8W組,n=7)。正常糖耐量對(duì)照組及糖耐量減低組每日兩次皮下注射等體積生理鹽水;Low-Exendin4組按5μg/kg 每日兩次皮下注射Exen
6、din-4;High-Exendin4組按10μg/kg 每日兩次皮下注射Exendin-4。分別于0周、4周、8周時(shí),禁飲食12~14h后,測(cè)量體重、鼠尾采血用快速血糖儀測(cè)空腹血糖及OGTT 2h 血糖,次日處死動(dòng)物,再次禁飲食12~14h,用5%水合氯醛0.6ml/100g 體重腹腔注射麻醉大鼠,腹主靜脈取血,血標(biāo)本迅速離心留取血清﹣70°C 保存,待用化學(xué)發(fā)光法測(cè)胰島素。取血后迅速取出胰腺,PBS 液沖洗,將胰腺組織用10%甲醛液
7、固定,脫水,石蠟包埋,常規(guī)切片,行HE 染色,光鏡下觀察各組胰島單個(gè)胰島面積、胰島數(shù)量組織形態(tài)學(xué)改變;用免疫組化方法測(cè)定各組胰腺組織PDX-1、BCL-XL、Caspase-3蛋白表達(dá)的變化。
所有計(jì)量資料均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s x±)表示,采用單因素方差分析、t檢驗(yàn)、SNK-q檢驗(yàn)分析結(jié)果。
結(jié)論:
1.糖耐量減低階段已出現(xiàn)胰島β細(xì)胞增殖減少,凋亡增多,胰島β細(xì)胞數(shù)量減少,胰腺組織PDX-1、
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