中藥提取庫中胰升血糖素樣肽-1（GLP-1）受體激動劑的高通量篩選.pdf

1、糖尿病的發(fā)病率逐年遞增，已成為繼心腦血管疾病、癌癥之后的嚴重威脅人類健康的第三大疾病。糖尿病分為胰島素依賴性糖尿病和非胰島素依賴型即2型糖尿病，其中2型糖尿病占總數的90-95％。2型糖尿病是一種胰島素抵抗伴胰島素不足，或胰島素分泌缺陷伴有或不伴有胰島素抵抗而導致的慢性高血糖疾病。目前，2型糖尿病藥物治療取得了一定進步，但療效有限且很大程度上存在毒副作用。因此，篩選出見效快且無毒副作用的新藥是2型糖尿病治療的首要任務。高通量藥物篩選技術

2、是近年發(fā)展起來的一項新的藥物發(fā)現(xiàn)技術，它結合自動化操作系統(tǒng)和微量靈敏的生物反應及檢測系統(tǒng)，利用分子或細胞水平的藥物篩選模型來評價化合物的生物活性。隨著生命科學技術的不斷發(fā)展，人們找到了與2型糖尿病相關的許多藥靶基因，為2型糖尿病實現(xiàn)高通量藥物篩選奠定了堅實的基礎。 胰升血糖素樣肽-1是一種前胰升血糖素衍生出來的多肽激素，能使正常人口服或靜脈注射葡萄糖后增加胰島素的分泌，因此也被稱為腸促胰島素；它是一種在消化時由腸胃系統(tǒng)釋放出來的

3、物質，能促進葡萄糖依賴性的胰島素從胰腺的β細胞中釋放出來。此外，GLP-1通過激發(fā)其受體產生生理功能，能明顯刺激胰島素分泌、增加胰島素敏感性、抑制胰升血糖素水平和減慢胃的排空，對2型糖尿病和1型糖尿病均有效，而且將其用于治療不會產生低血糖。因此，高通量篩選其受體的小分子化合物激動劑是2型糖尿病治療的新方向。 本實驗建立了GLP-1受體基因質粒和報告基因質粒，并將它們共同轉染到CHO細胞、SHSY5Y細胞和HEK293細胞中，通過

4、對EC50的測定，發(fā)現(xiàn)CHO細胞更適合作GLP-1R激動劑的高通量篩選。在共轉染到CHO細胞后，用G418進行篩選，利用GLP-1刺激細胞株優(yōu)化篩選條件，最后得到穩(wěn)定的篩選細胞株和陰性對照株，建立起GLP-1R高通量藥物篩選模型。篩選時，當化合物與膜表面的GLP-1受體結合后，激活GLP-1受體對應的信號級聯(lián)反應，改變胞內第二信使的表達水平，響應元件響應該變化，促進報告基因的表達，通過檢測在細胞溶質中報告基因的量間接評估化合物的生物活性