超高壓提取法、一測多評法和對照提取物法在關(guān)黃柏中的應(yīng)用研究.pdf

1、關(guān)黃柏為蕓香科植物黃檗Phellodendron amurense Rupr.的干燥樹皮。關(guān)黃柏主要活性成分是生物堿,其中最重要的生物堿為小檗堿和巴馬丁,在《中國藥典》2010年版中含量測定規(guī)定鹽酸小檗堿不得少于0.60％,鹽酸巴馬丁不得少于0.30％。本論文對關(guān)黃柏進(jìn)行了兩方面的研究,一方面是超高壓提取關(guān)黃柏生物堿的工藝研究;另一方面是一測多評法和對照提取物法測定關(guān)黃柏中生物堿含量研究。
　　超高壓提取法作為一種新的提取方法,首

2、次被應(yīng)用于關(guān)黃柏生物堿提取中。在本實(shí)驗(yàn)中,選擇小檗堿和巴馬丁作為檢測指標(biāo),先考察單因素(溶劑、壓力、溫度、料液比、溶劑濃度和時(shí)間)對提取率的影響,再根據(jù)單因素考察的結(jié)果選擇了四個(gè)因素(壓力、溫度、料液比和溶劑濃度)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。通過正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出超高壓提取的最佳條件為:壓力400MPa,溫度40℃,時(shí)間4min,料液比30:1和乙醇濃度50％。與加熱回流提取、超聲波提取、索氏提取相比較,超高壓提取有較高的提取率,較少的提取時(shí)間,較

3、低的提取溫度和能量消耗。另外,通過掃描電鏡觀察了提取前后關(guān)黃柏樣品的細(xì)胞結(jié)構(gòu),初步探討超高壓提取的機(jī)制,經(jīng)超高壓提取后,細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞,形成許多大孔,有利于成分的溶出,從而得到較高的提取率。
　　一測多評法和對照提取物法能很好的解決對照品缺乏和昂貴的問題,為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)多成分含量測定提供了方法。在一測多評實(shí)驗(yàn)中以小檗堿為對照,建立小檗堿與巴馬丁、藥根堿的校正因子(f藥根堿/小檗堿=0.9868,f巴馬丁/小檗堿=0.9959

4、),并進(jìn)行含量測定,同時(shí)采用外標(biāo)法測定20個(gè)批次關(guān)黃柏中3個(gè)成分的含量。結(jié)果表明,建立的校正因子重現(xiàn)性良好,采用校正因子計(jì)算的含量值與外標(biāo)法實(shí)測值之間無顯著性差異。對照提取物實(shí)驗(yàn)中首先采用動(dòng)態(tài)軸向壓縮系統(tǒng)(DAC)制備對照提取物(含藥根堿1.15％,巴馬丁13.94％,小檗堿30.77％),再利用含量標(biāo)化的對照提取物為對照測定20個(gè)批次關(guān)黃柏中小檗堿、巴馬丁和藥根堿含量,結(jié)果與外標(biāo)法比較無顯著性差異。因此,在缺少對照品的情況下,一測多評