脫細(xì)胞羊膜對(duì)兔同種異體跟腱移植后粘連的預(yù)防作用.pdf

1、目的:肌腱損傷是手外科領(lǐng)域較為常見的疾病，且多為多發(fā)性損傷，常需要肌腱移植修復(fù)缺損。同種異體肌腱來(lái)源充足，不會(huì)對(duì)患者造成副損傷，是理想的移植材料。然而同種異體肌腱移植后容易發(fā)生粘連，進(jìn)而影響功能的恢復(fù)，因此解決同種異體肌腱移植術(shù)后粘連是非常迫切的問題。羊膜光滑、透明、柔軟可塑性好，不含有血管及淋巴管，不產(chǎn)生排異反應(yīng);移植后可以形成連續(xù)性膠原薄墊植片，成為抑制粘連的機(jī)械性屏障;還可使炎癥細(xì)胞凋亡、對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)具有良好的通透性，能夠減輕炎性反

2、應(yīng)促進(jìn)肌腱愈合。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用羊膜包裹在同種異體跟腱周圍，移植修復(fù)新西蘭白兔跟腱缺損，評(píng)價(jià)其預(yù)防肌腱粘連及促進(jìn)肌腱愈合的有效性，為臨床同種異體肌腱的移植及粘連的預(yù)防提供理論依據(jù)。
　　 方法:選用3月齡健康雄性新西蘭大耳白兔30只，平均體重2.25±0.05kg。編號(hào)后隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（羊膜包裹同種異體肌腱組）和對(duì)照組（同種異體肌腱組）。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予速眠新(2ml/kg)行肌肉注射麻醉，常規(guī)備皮、消毒、鋪巾，驅(qū)血，大腿中部束橡皮條止血

3、帶。于雙側(cè)跟腱邊緣縱向切開皮膚、皮下組織，解剖分離跟腱，在跟骨附著點(diǎn)上方1.0cm處切取1.5cm長(zhǎng)跟腱，制備跟腱缺損模型。兩組切取的跟腱一對(duì)一互換，在手術(shù)顯微鏡下采用3-0肌腱線行改良Kessler縫合，實(shí)驗(yàn)組15只動(dòng)物的跟腱移植處植入羊膜小片，環(huán)形包繞移植跟腱及其上下吻合端，最后縫合皮膚。對(duì)照組15只動(dòng)物的移植跟腱不包裹羊膜，其余處理均同實(shí)驗(yàn)組。無(wú)菌敷料包扎切口，石膏屈膝、趾屈位固定，每隔3天切口局部75％酒精消毒，給予被動(dòng)活動(dòng)膝關(guān)

4、節(jié)及踝關(guān)節(jié)，防止關(guān)節(jié)僵硬。術(shù)后12天拆線，21天后去除外固定自由活動(dòng)。術(shù)后每日予青霉素(4ug/kg)肌注，預(yù)防感染5天。
　　 大體觀察:于術(shù)后2周、4周在兩組各取2只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，處死后立即沿原手術(shù)切口入路，觀察移植跟腱的色澤、愈合及粘連的情況。
　　 組織學(xué)觀察:于術(shù)后2周、4周大體觀察后，以跟腱吻合口為中心切取長(zhǎng)1cm的跟腱段。固定，脫水，包埋、切片，厚度為5μm，分別進(jìn)行HE和Masson染色。HE染色切片于光鏡下

5、觀察跟腱周組織充血、水腫情況，跟腱斷端愈合情況及與周圍組織粘連程度;Masson染色切片觀察跟腱膠原纖維排列狀況。
　　 透射電鏡觀察:于術(shù)后2周、4周大體觀察后，從跟腱吻合口處切取大小為1mm×1mm×1mm組織塊，包埋，切片，透射電鏡觀察細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的變化情況。
　　 流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè):分別于術(shù)后2、4、6周，每組取5只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，于耳緣靜脈采血1ml至EDTA-K2抗凝管中，行外周血CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)檢

6、測(cè)。以反映免疫排斥反應(yīng)的程度。
　　 生物力學(xué)測(cè)定:分別于術(shù)后2、4、6周每組取4只動(dòng)物處死后，切取雙側(cè)小腿及足部行生物力學(xué)測(cè)試。①拉斷跟腱粘連帶功耗(W0)測(cè)定:分別將跟腱及脛骨固定在試驗(yàn)機(jī)夾具上進(jìn)行牽拉，拉伸速度為15mm/min，滿載荷量程設(shè)定為100N。跟腱滑動(dòng)16.0mm后停止，得到拉力-位移曲線，益線下的面積為功耗W1。將標(biāo)本恢復(fù)原狀，各項(xiàng)條件不變，再次牽拉16.0mm，同理得到功耗W2。拉斷跟腱粘連帶功耗(W0):

7、W0=W1—W2。②跟腱最大抗拉伸斷裂強(qiáng)度(Pmax)的測(cè)定:取出跟腱段，固定于生物力學(xué)試驗(yàn)機(jī)夾具上，滿載荷量程設(shè)定為100N，以15mm/min的拉伸速度進(jìn)行牽拉至跟腱自任一吻合口處斷裂，電腦運(yùn)行測(cè)定程序并與試驗(yàn)機(jī)相連，同步測(cè)量并記錄跟腱最大抗拉伸斷裂強(qiáng)度（Pmax）。
　　 羥脯氨酸含量測(cè)定:分別于術(shù)后2、4、6周力學(xué)實(shí)驗(yàn)后，取動(dòng)物移植跟腱的新鮮腱段標(biāo)本，經(jīng)生理鹽水清洗、ELISA法檢測(cè)跟腱愈合過程中的羥脯氨酸(Hyp)含量

8、。
　　 結(jié)果:①大體觀察:兩組跟腱周圍均充血、水腫，且隨時(shí)間延長(zhǎng)而緩解，實(shí)驗(yàn)組跟腱表面光滑，可見疏松粘連帶，對(duì)照組跟腱表面不光滑為廣泛致密纖維組織粘連帶。②組織學(xué)觀察顯示，術(shù)后2、4周實(shí)驗(yàn)組炎性反應(yīng)和浸潤(rùn)范圍均較對(duì)照組局限且膠原纖維排列較整齊。③透射電鏡觀察顯示，術(shù)后2、4周，實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞核大，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富，新生的膠原纖維排列整齊、粗大，對(duì)照組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)少，且內(nèi)容物少。④流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè):術(shù)后2、4、6周，實(shí)驗(yàn)組CD4+、CD

9、8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值均低于對(duì)照組;差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。⑤生物力學(xué)測(cè)定:術(shù)后2、4、6周各時(shí)間點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)組跟腱最大拉伸斷裂強(qiáng)度均大于對(duì)照組;而拉斷粘連帶功耗小于對(duì)照組;差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;⑥羥脯氨酸(Hyp)含量，術(shù)后2、4、6周各時(shí)間點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)組跟腱羥脯氨酸(Hyp)含量均大于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　 結(jié)論:羊膜做為一種移植材料，一方面可以有效的