靜脈移植同種異體ADMSCs對LPS誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠的治療作用.pdf

1、目的:(1)體外分離培養(yǎng)Balb/c小鼠脂肪間充質(zhì)干細胞(ADMSCs)，對其表面標記分子和多向分化潛能進行檢測。(2)通過觀察靜脈移植同種異體ADMSCs對膿毒癥小鼠生存率、體溫、肝腎功能、炎癥因子（TNF-α、IL-6、IL-8）和抗炎癥因子（IL-4、IL-10）的影響，探討ADMSCs對LPS誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠的治療作用及其機制。
　　方法:(1)獲取SPF級Balb/c小鼠腰背部、大網(wǎng)膜處的脂肪組織，采用膠原酶消化法和貼壁

2、法分離獲得Balb/c小鼠ADMSCs，并對其進行體外培養(yǎng)。選擇第3代ADMSCs，采用流式細胞技術(shù)對其表面標記分子進行檢測，通過化學(xué)誘導(dǎo)法定向誘導(dǎo)細胞成骨、成脂肪、成軟骨分化，分別予以茜素紅染色，油紅O染色，Alcian blue染色進行鑒定。(2) Balb/c小鼠60只，體重22-28g（8-12周齡），隨機分為空白對照組20只，膿毒癥對照組（LPS組）20只，ADMSCs移植組（ADMSCs組）20只。經(jīng)尾靜脈注射LPS（劑量為

3、15mg/kg，濃度1mg/mL）建立膿毒癥模型，空白對照組注射生理鹽水，15mL/kg。ADMSCs組于模型建立5 min后經(jīng)尾靜脈注射ADMSCs(106，100uL)，空白對照組和LPS組均注射生理鹽水100uL。每4小時觀察并記錄小鼠生存情況和體溫，直至48h。(3) Balb/c小鼠30只，體重22-28g（8-12周齡）30只小鼠被隨機分為3組，即空白對照組10只、LPS組10只和ADMSCs組10只，小鼠經(jīng)尾靜脈注射LPS

4、（劑量為10 mg/kg，濃度為1 mg/mL）建立膿毒癥模型，其余處理方法同上。給藥后6h經(jīng)心臟采血檢測肝腎功能指標SCr、ALT和AST水平，同時采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清炎癥因子和抗炎癥因子TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8及IL-10水平。
　　結(jié)果:(1)成功分離培養(yǎng)出Balb/c小鼠ADMSCs，流式鑒定結(jié)果顯示:CD11b、CD45表達呈陰性，CD34、CD44、CD106、CD29表達均呈陽性，Balb/c小

5、鼠ADMSCs在特定誘導(dǎo)條件下，具有向骨細胞、脂肪細胞和軟骨細胞分化的潛能。(2)生存率:正常對照組48h內(nèi)小鼠生存率為100％。LPS組和ADMSCs組小鼠隨時間延長，生存率逐漸下降。ADMSCs組24h生存率為65％，較同時間點LPS組(30％)高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。生存分析結(jié)果顯示ADMSCs組小鼠總體生存率較LPS組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。(3)體溫:正常對照組小鼠體溫在正常范圍內(nèi)波動，LPS組

6、和ADMSCs組小鼠體溫分別在0-8 h、0-12h內(nèi)有下降，而后逐漸回升并保持在正常范圍內(nèi)。LPS組小鼠平均體溫在4h、8h、12h、16h均低于36℃，低于同時間段正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)，ADMSCs組小鼠平均體溫在4h、8h、16h均較同時間段LPS組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。(4)肝腎功能:建模后6h，LPS組小鼠血清SCr、ALT及AST水平較正常對照組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)

7、; ADMSCs組小鼠血清ALT和AST水平較LPS組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。(5)炎癥因子和抗炎癥因子水平:建模后6h，LPS組小鼠所有血清炎癥因子水平較正常對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05); ADMSCs組小鼠血清TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8及IL-10水平均低于LPS組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:(1)本研究所獲得細胞具有貼壁生長、干細胞表型及多向分化能力，符合ADM