不同劑量胸腺肽α1對SEB復(fù)合LPS誘導(dǎo)小鼠膿毒癥模型炎癥反應(yīng)的影響.pdf

1、目的：通過比較大劑量胸腺肽α1與小劑量胸腺肽α1對SEB復(fù)合LPS誘導(dǎo)小鼠膿毒癥模型中血清INF-γ、脾臟NF-κBp65及組織病理的影響，評(píng)估不同劑量胸腺肽α1對膿毒癥小鼠炎癥反應(yīng)的影響。
　　方法：
　　1建立動(dòng)物模型
　　1.1本實(shí)驗(yàn)前期采用不同劑量的SEB和LPS對小鼠復(fù)合感染膿毒癥模型的建立進(jìn)行摸索實(shí)驗(yàn)
　　1.1.1實(shí)驗(yàn)分組：根據(jù)完全隨機(jī)化方法，將80只小鼠平均分成10組，每組8只。
　　1)5

2、00μg/kgSEB+1500μg/kgLPS組
　　2)500μg/kgSEB+1000μg/kgLPS組
　　3)500μg/kgSEB+500μg/kgLPS組
　　4)400μg/kgSEB+1500μg/kgLPS組
　　5)400μg/kgSEB+1000μg/kgLPS組
　　6)400μg/kgSEB+500μg/kgLPS組
　　7)300μg/kgSEB+1500μg/kgLPS組

3、
　　8)300μg/kgSEB+1000μg/kgLPS組
　　9)300μg/kgSEB+500μg/kgLPS組
　　10)PBS對照組
　　1.1.2按照分組類別分別給小鼠腹腔注射用PBS溶解的不同劑量的SEB，每只注射0.2ml，同時(shí)給對照組腹腔注射PBS0.2ml/只。
　　1.1.32h后，按照分組類別分別給小鼠腹腔注射用PBS溶解的不同劑量的LPS，每只注射0.2ml，同時(shí)給對照組腹腔注射P

4、BS0.2ml/只。
　　1.1.4觀察小鼠72h的癥狀及存活情況。
　　1.2觀察72小時(shí)，發(fā)現(xiàn)只有PBS空白組小鼠均未出現(xiàn)任何癥狀，聯(lián)合給藥組中，4小時(shí)內(nèi)均出現(xiàn)癥狀，300μg/kgSEB+500μg/kgLPS組僅出現(xiàn)輕度精神萎靡、進(jìn)食及活動(dòng)減少，其余各組均出現(xiàn)了立毛、呼吸急促、精神萎靡、不飲食及腹瀉現(xiàn)象，500μg/kgSEB+1500μg/kgLPS組72h后僅有1只小鼠存活，500μg/kgSEB+1000μg/

5、kgLPS組和400μg/kgSEB+1500μg/kgLPS組有2只存活，500μg/kgSEB+500μg/kgLPS組有3只存活，400μg/kgSEB+1000μg/kgLPS組有5只存活，400μg/kgSEB+500μg/kgLPS組有6只存活，300μg/kgSEB+1500μg/kgLPS組、300μg/kgSEB+1000μg/kgLPS組、300μg/kgSEB+500μg/kgLPS組和PBS組的小鼠均存活，聯(lián)合給

6、藥組中，300μg/kgSEB+500μg/kgLPS組小鼠癥狀較輕，6小時(shí)后即癥狀緩解，精神好轉(zhuǎn)，開始進(jìn)食，300μg/kgSEB+1000μg/kgLPS組小鼠在3～8h癥狀最重，24小時(shí)后癥狀緩解，48小時(shí)后癥狀消失，而300μg/kgSEB+1500μg/kgLPS組直至48小時(shí)癥狀緩解，64小時(shí)后癥狀消失。因此，根據(jù)上述觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中嘗試采用了300μg/kgSEB+1000μg/kgLPS劑量組進(jìn)行了重復(fù)實(shí)驗(yàn)

7、，建立了SEB與LPS復(fù)合感染小鼠膿毒癥模型。
　　2適齡BALB/c雄性小鼠，體重19g-21g，采用腹腔注射300μg/kgSEB，2小時(shí)后給予腹腔注射1000μg/kgLPS劑量建立SEB與LPS復(fù)合感染小鼠膿毒癥模型，根據(jù)完全隨機(jī)化方法，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表將小鼠分為對照組、小劑量組、大劑量組，小劑量組、大劑量組分別給予皮下注射100μg/kg和2000μg/kg的胸腺肽α1，對照組給予同等劑量PBS液。比較2h、4h、6h三組

8、小鼠血清中細(xì)胞因子的表達(dá)水平，E-LISA檢測血清INF-γ濃度，取脾臟，Westernblot檢測NF-κBp65表達(dá)量。取6h小鼠肺組織行HE染色，觀察肺組織病理學(xué)變化。
　　結(jié)果：
　　給藥4小時(shí)內(nèi)對照組、小劑量組、大劑量組小鼠均出現(xiàn)了立毛、呼吸急促、不飲食、腹瀉、精神萎靡、對周圍環(huán)境失去興趣、自潔行為消失，眼瞼分泌物增多等現(xiàn)象，而小劑量組和大劑量組的小鼠癥狀表現(xiàn)較對照組輕，5～6小時(shí)大部分小鼠精神改善，開始恢復(fù)自潔行

9、為，而對照組癥狀未緩解。
　　在給藥后2小時(shí)，大劑量組、小劑量組血清INF-γ及脾臟NF-κBp65較對照組上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,小劑量組與大劑量組相比，結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在給藥后4小時(shí)，大劑量組、小劑量組血清INF-γ及脾臟NF-κBp65與對照組相比，結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在給藥后6小時(shí)，大劑量組、小劑量組血清INF-γ及脾臟NF-κBp65與對照組相比，結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.

10、05）。
　　觀察各組6h小鼠肺組織病理學(xué)變化發(fā)現(xiàn)：對照組可見部分肺泡壁破壞、有肺間質(zhì)出血現(xiàn)象，小劑量組可見肺間質(zhì)血管充血擴(kuò)張，未見肺間質(zhì)出血；大劑量組可見肺間質(zhì)血管充血擴(kuò)張，未見肺間質(zhì)出血；大劑量組較對照組肺組織損傷較輕，大劑量組與小劑量組比較未見明顯差異。
　　結(jié)論：
　　1、在炎癥反應(yīng)早期胸腺肽α1可升高膿毒癥小鼠血清INF-γ濃度及脾臟NF-κBp65表達(dá)水平，增強(qiáng)小鼠免疫應(yīng)答。
　　2、大劑量胸腺肽α1