銀耳不同生長發(fā)育階段差異表達蛋白及其基因的研究.pdf

1、銀耳是一種典型的二形態(tài)藥食兩用真菌，富含多糖、蛋白質、維生素及無機鹽，被譽為“菌中之冠”。蛋白質是基因表達的產物，是生理功能的執(zhí)行者，從蛋白質水平入手克隆基因，再進行基因功能的研究可以更加全面立體地闡明基因所起到的實際功能，進而可以更好地理解生命活動的發(fā)生機理及調控規(guī)律。本研究采用Tris-飽和酚法提取銀耳芽孢及菌絲總蛋白后，應用2-DE及MALDI-TOF MS/MS技術找出并鑒定了銀耳芽孢及菌絲這兩個不同生長發(fā)育階段的差異表達蛋白，

2、并根據其中2個差異表達蛋白的氨基酸序列設計簡并引物，克隆了其差異表達基因，為銀耳不同生長發(fā)育階段調控機制的研究奠定了基礎。結果如下:
　　1、在液氮研磨的基礎上，采用超聲波與高壓均質破碎細胞，通過顯微鏡觀察細胞破碎效果、Bradford法測定蛋白含量并進行SDS-PAGE凝膠電泳分析，比較了Tris-飽和酚法、TCA/丙酮沉淀法及Tris-飽和酚結合TCA/丙酮沉淀法提取銀耳芽孢總蛋白的效果，結果表明高壓均質的細胞破碎效果優(yōu)于超聲

3、波，三種方法所得到的蛋白含量分別為2.33 mg/mL、1.26 mg/mL及1.02 mg/mL，且Tris-飽和酚法所得電泳條帶亮度及清晰度均優(yōu)于其他兩種方法。進而應用Tris-飽和酚法提取銀耳菌絲總蛋白同樣取得了很好的效果，從而建立了銀耳芽孢及菌絲總蛋白的一種有效提取方法。
　　2、應用Tris-飽和酚法提取的銀耳芽孢及菌絲總蛋白通過2-DE分析選取了53個差異蛋白點，將這些差異蛋白點進行MALDI-TOF MS/MS分析，