低滲核黃素-UVA誘導(dǎo)的兔角膜交聯(lián)術(shù)-去上皮與保留上皮的差異性研究.pdf

1、目的:
　　 核黃素/UVA誘導(dǎo)的角膜膠原交聯(lián)術(shù)可以增加膠原纖維的交聯(lián)度，增強(qiáng)角膜生物力學(xué)特性，阻止圓錐角膜、角膜膨隆進(jìn)展，用于治療進(jìn)展期圓錐角膜取得理想效果。研究表明，角膜膠原交聯(lián)治療時(shí)，若角膜厚度大于400μm，紫外線(xiàn)不會(huì)損傷角膜內(nèi)皮細(xì)胞、晶狀體、視網(wǎng)膜等組織。但圓錐角膜是以角膜進(jìn)行性薄化為特征，晚期患者角膜厚度多低于400μm，從而一定程度限制了該技術(shù)在圓錐角膜的應(yīng)用。研究也證實(shí)，低滲核黃素溶液點(diǎn)眼可以增加角膜厚度，可以用

2、于薄角膜患者的治療;由于核黃素分子量較大，角膜上皮的完整性顯著影響核黃素的滲透，影響交聯(lián)療效。本研究旨在探討兔眼去角膜上皮與保留角膜上皮時(shí)，核黃素/UVA誘導(dǎo)的角膜交聯(lián)術(shù)后角膜生物力學(xué)變化及對(duì)其角膜基質(zhì)細(xì)胞的影響。
　　 方法:
　　 1.紫外線(xiàn)照射
　　 將兔全麻后開(kāi)瞼器開(kāi)瞼，去上皮組刮除中央7.5mm的角膜中央?yún)^(qū)域上皮，照射前半小時(shí)開(kāi)始滴0.1％核黃素低滲溶液，角膜測(cè)厚儀測(cè)量角膜厚度，至厚度超過(guò)400μm，于

3、裂隙燈下觀(guān)察核黃素已進(jìn)入前房后開(kāi)始照射。照射時(shí)間30min、照射距離50mm、光束直徑為7.5mm、波長(zhǎng)為370nm，能量密度為3mW/cm2，相當(dāng)于5.4J/cm2，照射中每2min點(diǎn)一次0.1％核黃素溶液。保留上皮組直接點(diǎn)0.1％低滲核黃素溶液，至角膜厚度大于400μm時(shí)開(kāi)始照射。
　　 2.角膜生物力學(xué)測(cè)試
　　 角膜膠原交聯(lián)術(shù)后立即處死兔子，取中央10mm×3mm的長(zhǎng)條角膜片，試件在INSTRON試驗(yàn)機(jī)上實(shí)驗(yàn)，將

4、角膜片垂直夾在上下兩端的夾具上，間隔8～10mm。角膜破壞試驗(yàn):角膜試件拉伸至斷裂破壞，根據(jù)得出的數(shù)據(jù)可計(jì)算出彈性模量及受測(cè)角膜試件所能承載的最大拉力，即最大應(yīng)力。實(shí)驗(yàn)以加載速度2mm/min逐漸增加應(yīng)力，終止條件為試件被拉斷破壞，計(jì)算機(jī)自動(dòng)輸出數(shù)據(jù)。
　　 3.角膜組織病理學(xué)觀(guān)察
　　 切取角膜中央部位組織，石蠟包埋，4μm切片，進(jìn)行HE染色觀(guān)察角膜基質(zhì)內(nèi)膠原纖維形態(tài)變化情況等。
　　 4.角膜細(xì)胞的毒性作用<

5、br>　　 取出角膜后用石蠟包埋，做4μm切片，行TUNEL檢測(cè)。具體操作步驟依照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。結(jié)果判定:陽(yáng)性反應(yīng)為細(xì)胞核被染成棕黃色。計(jì)數(shù)5個(gè)隨機(jī)高倍視野的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，測(cè)得的數(shù)據(jù)以x±s表示。
　　 結(jié)果:
　　 1.點(diǎn)0.1％低滲核黃素溶液后，兩組兔眼角膜厚度均可增加達(dá)到400μm。
　　 2.經(jīng)交聯(lián)治療后，去上皮組角膜試件的最大應(yīng)力明顯高于保留上皮組和對(duì)照組(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0

6、.05）。彈性模量:E去上皮組＞E保留上皮組＞E對(duì)照組（P＜0.05）。
　　 3.經(jīng)交聯(lián)治療后，兩組間角膜基質(zhì)纖維未見(jiàn)明顯變化，細(xì)胞凋亡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論:
　　 1.0.1％低滲核黃素溶液點(diǎn)眼，可顯著增加角膜厚度，去上皮與保留上皮均可使角膜厚度達(dá)到400μm以上的安全照射厚度。
　　 2.0.1％低滲核黃素溶液與長(zhǎng)波紫外線(xiàn)A可誘導(dǎo)角膜膠原纖維交聯(lián)度的增加。
　　 3.低滲核黃素/紫外線(xiàn)