兔角膜緣上皮干細(xì)胞缺乏對角膜上皮修復(fù)的影響及年齡相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　 探討年齡因素對角膜緣干細(xì)胞功能的影響，在角膜緣干細(xì)胞缺乏時影響中央角膜上皮修復(fù)的因素及其與年齡的相關(guān)性。
　　 方法：
　　 隨機取健康無眼疾幼年、成年、老年新西蘭大白兔各10只，雌雄不限，2011年4月～10月在顯微鏡下精確手術(shù)去除角膜緣板層上皮組織。角膜組織常規(guī)組織學(xué)HE染色、免疫組織化學(xué)SAB法染色(2011-4-24、2011-5-4、2011-5-11)及圖像分析進行研究，相關(guān)數(shù)據(jù)做統(tǒng)計學(xué)

2、處理；采用Image-ProPlus(IPP)6.0圖片分析軟件，計算兔眼切除角膜緣上皮后，中央角膜上皮愈合率；用光學(xué)顯微鏡觀察中央角膜上皮損傷修復(fù)過程的組織學(xué)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、裂隙燈顯微鏡觀察結(jié)果：
　　 1.1.首次角膜損傷：隨著時間的推移，全周切除角膜緣上皮后，角膜上皮愈合面積逐漸增加，但角膜上皮損傷的愈合率逐漸減慢。隨年齡增長成年組比幼年組角膜上皮修復(fù)損傷的能力明顯減弱，而成年組與老年組之間

3、差別不明顯，損傷兩周后，所有組別實驗眼角膜周邊開始出現(xiàn)新生血管增殖，并隨時間的推移逐漸向角膜中央延伸（圖1）。對照眼出現(xiàn)新生血管增殖者只有成年組(2/10)及老年組(2/10)少數(shù)（圖2），幼年組未見。各組實驗眼均有數(shù)例角膜周邊可見結(jié)膜組織向心性侵入，幼年組2/10、成年組4/10、老年組5/10。所有幼年組對照眼角膜均未見新生血管及結(jié)膜組織長入。將30只兔子的實驗眼所取下的角膜緣進行組織塊培養(yǎng)，均形成了干細(xì)胞來源的上皮細(xì)胞膜片。

4、>　　 1.2.二次角膜損傷：各組實驗眼均可見新生血管從四周長入角膜，逐漸向角膜中央發(fā)展，顯示出延遲愈合和角膜上皮侵蝕。各組實驗眼中均發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)性角膜上皮侵蝕，其中幼年組占2/9，成年組占6/9，老年組占7/9，幼年組對照眼均未見陽性發(fā)現(xiàn)，但成年組和老年組對照眼出現(xiàn)數(shù)例角膜新生血管增殖且隨時間向角膜中央侵入，但都未達(dá)角膜中央。
　　 2、光鏡觀察
　　 2.1.HE染色：第一次損傷修復(fù)后3周，幼年組對照眼角膜中央缺損區(qū)上

5、皮細(xì)胞恢復(fù)5～6層，成年組、老年組對照眼均恢復(fù)4～5層，細(xì)胞排列整齊，基底膜完整，中央?yún)^(qū)未見杯狀細(xì)胞。幼年組實驗眼角膜上皮缺損區(qū)恢復(fù)2～3層，成年組、老年組實驗眼恢復(fù)1～2層，細(xì)胞層次減少、排列紊亂，可見基質(zhì)層新生血管腔，內(nèi)有血細(xì)胞，上皮下有炎癥細(xì)胞浸潤。第二次損傷后，光鏡下見結(jié)膜及結(jié)膜下組織覆蓋角膜緣及周邊部角膜表面，含有大量的杯狀細(xì)胞和新生血管，并隨時間而逐漸向中央?yún)^(qū)發(fā)展，固有層中有多量炎癥細(xì)胞浸潤。
　　 2.2.免疫組織