雌二醇、來曲唑對青年蛋雞髓質骨形成的影響及其機理研究.pdf

1、雌禽性成熟前，在股骨和脛骨骨髓腔中新生大量針狀骨，稱之為髓質骨。髓質骨的產(chǎn)生與體內雌激素濃度升高有關，并伴隨著整個產(chǎn)蛋期而存在。在產(chǎn)蛋周期中，髓質骨進行周期性吸收和重建，為蛋殼鈣化提供鈣源。髓質骨反復地吸收與重建，最終使皮質骨變薄、蛋雞發(fā)生骨質疏松。本文通過雌激素和抗雌激素藥物來研究其對蛋雞髓質骨形成的影響，并進一步探討其機理，為蛋雞骨質疏松癥防治提供理論依據(jù)。 試驗I：雌二醇對雞髓質骨形成及其受體表達的影響 本試驗研究

2、了雌激素對青年蛋雞髓質骨形成的誘導作用及其對雌激素受體表達的影響。14周齡135羽公雞，115羽母雞預飼1周后，各隨機殺5只采骨骼樣品，然后將剩余的公、母雞各隨機平均分為兩組，A組為公雞對照組，B組為公雞試驗組、肌注17β-雌二醇2 mg/d；C組為母雞對照組，D組為母雞試驗組、口服來曲唑0.5 mg/d，試驗為期18 d。在試驗開始和試驗過程中采集骨組織用于骨切片制作。試驗結果顯示，A組未見髓質骨產(chǎn)生；B組在試驗第6天開始產(chǎn)生髓質骨，

3、C組約在性成熟前10 d左右開始出現(xiàn)髓質骨，D組未見髓質骨產(chǎn)生。雌激素免疫組化結果表明，試驗開始時，A、B組雌激素受體表達量極顯著低于C、D組(P<0.01)；實驗結束時，B、C組之間比較，雌激素受體表達量差異不顯著，但極顯著高于A(P<0.01)；D組試驗結束時未見雌激素受體表達。 結論：雌激素可以誘導雌激素受體大量表達，促進髓質骨產(chǎn)生。 試驗II：青年蛋雞骨超微結構研究及其在髓質骨形成過程中的變化 本試驗研究

4、了青年蛋雞骨骼的超微結構形態(tài)及髓質骨形成過程中的骨超微結構的變化。14周齡135羽公雞，115羽母雞預飼1周后，各隨機殺5只采骨骼樣品，然后將剩余的公、母雞各隨機平均分為兩組，A組為公雞對照組，B組為公雞試驗組、肌注17β-雌二醇2 mg/d；C組為母雞對照組，D組為母雞試驗組、口服來曲唑0.5 mg/d，試驗為期18 d。在試驗開始和試驗過程中采集骨組織用于電鏡掃描觀察。試驗結果顯示，在掃描電鏡下，骨小梁呈表面粗糙的板狀，表面有成骨細

5、胞和破骨細胞附著；成骨細胞呈小顆粒狀，顏色稍亮；破骨細胞體積較大，多為團狀、片狀、條狀；骨鹽晶體成片狀生長在骨小梁表面。在髓質骨形成期間，骨小梁表面有大量成骨細胞附著，破骨細胞相對較少。 結論：髓質骨形成主要以成骨方式進行，與成骨細胞關系密切。 試驗Ⅲ：髓質骨形成對骨形態(tài)計量學及骨放射密度的影響 本試驗研究了蛋雞髓質骨形成階段其骨形態(tài)計量學和骨密度的變化。14周齡135羽公雞，115羽母雞預飼1周后，各隨機殺5只

6、采骨骼樣品，然后將剩余的公、母雞各隨機平均分為兩組，A組為公雞對照組，B組為公雞試驗組、肌注17β-雌二醇2 mg/d；C組為母雞對照組，D組為母雞試驗組、口服來曲唑0.5 mg/d，試驗為期18 d。在試驗開始時和試驗過程中采集骨組織用于骨形態(tài)計量學和骨放射密度的測定。結果顯示，A、B組骨皮質指數(shù)差異不顯著，C組顯著低于D組(P<0.05)；A組皮質骨面積顯著大于B、C和D組(P<0.05)；A組皮質骨面積百分率與其他各組相比差異不顯

7、著，B組顯著高于C組(P<0.05)；C、D組之間差異不顯著。A、B組比較，骨放射密度差異不顯著，但A組顯著高于D組(P<0.05)，B組顯著高于C和D組，C組顯著高于D。 結論：髓質骨形成之初對皮質骨沒有影響，髓質骨具有一定的放射密度。雌、雄激素均可促進骨骼生長，但雄激素作用強于雌激素；來曲唑可抑制青年蛋雞骨骼發(fā)育。 試驗Ⅳ：雌二醇對蛋雞骨代謝生化指標的影響 本試驗研究了雌激素誘導蛋雞髓質骨形成過程中血漿鈣、磷

8、、ALP、StrACP的變化。14周齡135羽公雞，115羽母雞預飼1周后，各隨機采集10份血液樣品并殺5羽采骨骼樣品，然后將剩余的公、母雞各隨機平均分為兩組，A組為公雞對照組，B組為公雞試驗組、肌注17β-雌二醇2 mg/d；C組為母雞對照組，D組為母雞試驗組、口服來曲唑0.5 mg/d，試驗為期18 d。在試驗開始時和試驗過程中采集血液樣品，進行血液生化和性激素水平測定。結果表明，A組雄激素水平隨蛋雞日齡增加而上升且極顯著高于B組(

9、P<0.01)；C組雄激素水平基本恒定，在試驗后期顯著低于D組(P<0.05)。A組雌激素水平基本恒定，且顯著低于B組(P<0.05)；B組雌激素濃度在試驗初期明顯上升，后又有所下降；C組雌激素水平隨日齡增加而上升，且顯著高于D組(P<0.05)；D組用藥后，雌激素水平下降。各組血漿鈣均有升高的趨勢；A組血漿鈣水平顯著低于B、C組(P<0.05)，A、D組比較差異不顯著；B組血漿鈣水平顯著高于C、D組(P<0.05)；C組血漿鈣顯著高于

10、D組(P<0.05)。B組血漿磷濃度顯著高于其他三組，其余各組血漿磷水平差異不顯著。各組StrACP均有上升趨勢，各組差異不顯著。各組ALP均有升高趨勢，A組ALP活性低于B組，但差異不顯著；到試驗后期C組ALP活性顯著高于D組(P<0.05)。 結論：雌激素可以提高血漿鈣、磷水平，增加StrACP和ALP活性，髓質骨形成時體內進行著旺盛的骨代謝。來曲唑有顯著的雌激素抑制作用。 試驗Ⅴ：雌二醇對體外雞胚成骨細胞增殖及凋亡

11、的影響 本試驗研究了不同濃度雌激素和來曲唑對體外雞胚成骨細胞增殖的影響及雌激素對成骨細胞凋亡的影響。應用酶消化法獲取15日齡雞胚額骨成骨細胞，用不同濃度的雌激素和來曲唑處理10 h、24 h后，通過MTT法測定細胞增殖率。將0 pg/mL、20 pg/mL雌激素培養(yǎng)基處理成骨細胞24 h后，經(jīng)annexin V-FITC和PI染色后，用流式細胞儀檢測細胞的凋亡和周期情況。結果表明，雌激素對成骨細胞增殖有一定的促進作用，20pg/

12、mL時增殖作用最強；250 nglmL來曲唑對成骨細胞有顯著的促增殖作用。雌激素組成骨細胞凋亡率為0.17％，對照組為1.18％。 結論：雌激素可促進成骨細胞增殖，并具有抗成骨細胞凋亡的作用。 試驗Ⅵ：雌二醇對體外雞胚成骨細胞ALP活性及其雌激素受體基因表達的影響 本試驗研究了不同濃度雌激素對體外培養(yǎng)雞胚成骨細胞ALP活性的影響，并進一步研究雌激素對成骨細胞雌激素受體表達的作用，以探討雌激素的作用機理。應用酶消化

13、法獲取15日齡雞胚額骨成骨細胞，用不同濃度的雌激素和來曲唑處理24 h后，通過PNPP測定細胞ALP活性。將20 pg/mL雌激素和250 ng/mL來曲唑處理成骨細胞24 h，用RT-PCR的方法檢測雌激素受體基因的相對表達情況，并用β-actin作為內參照予以矯正。結果顯示，10 pg/mL雌激素組堿性磷酸酶活性顯著高于對照組，來曲唑對堿性磷酸酶活性沒有明顯影響。與對照組相比，雌激素可以誘導雌激素受體基因表達，來曲唑則抑制雌激素受體