簕竹屬部分竹種間親緣關(guān)系的RAPD標(biāo)記研究.pdf

1、本研究利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)，對我國簕竹屬(Bambusa)的28個竹種或變型即屬于竹亞屬的車筒竹(Bambusa sinospinosa)、木竹(B.rutila)、錦竹(B.subaequalis)、坭竹(B.gibba)和佛肚竹(B.ventricosa)；屬于單竹亞屬的甲竹(B.remotiflora)、單竹(B.cerosisssima)、紫斑竹(B.textiliscv.Maculata)和崖州竹(B.te

2、xtilis var.gracilis)；屬于孝順竹亞屬的馬甲竹(B.tulda)、青絲黃竹(B.eutuldoides McClure var.viridi-vittata)、撐蒿竹(B.pervariabilis)、花眉竹(B.longispiculata)、青竿竹(B.tuloides)、信宜石竹(B.subtruncata)、媽竹(B.boniopsis)、魚肚腩竹(B.glbboides)、花竹(B.albo-lineata)

3、、藤枝竹(B.lenta)、破篾黃竹(B.contracta)、龍頭竹(B.vulgaris)及其變型種黃金間碧竹(B.vulgaris cv.Vittata)和大佛肚竹(B.vulgaris cv.Wamin)、孝順竹(B.multiplex)及其變型種小琴絲竹(B.multiplex cv.Alphonse-Karr)、銀絲竹(B.multiplex cv.Silverstripe)、鳳尾竹(B.multiplex cv.Fernl

4、eaf.)、觀音竹(B.multiplex var.riviereorum)進(jìn)行基因組多態(tài)性分析，篩選了16個隨機(jī)引物，均可擴(kuò)增出清晰可重復(fù)的條帶且多態(tài)性明顯。在DPS 7.05軟件中，統(tǒng)計這些擴(kuò)增產(chǎn)物來計算Jaccard遺傳距離，建立Nei_Li最長距離法聚類分析圖。本實驗得到如下結(jié)論： (1)建立了簕竹屬植物RAPD分析的技術(shù)體系：反應(yīng)終體積是20μl，含有10×Buffer2.0μl、Mg2+3.5mM、dNTPs0.4m

5、M、引物0.6μM、Taq酶3.0U、模板DNA40ng、加滅菌ddH2O定容至20μl。PCR循環(huán)程序如下：94℃預(yù)變性2min； 94℃變性30s，34℃退火30s，70℃延伸90s，38個循環(huán)；72℃延伸7min 4℃結(jié)束擴(kuò)增。 (2)從96條引物中，篩選出能夠擴(kuò)增出穩(wěn)定產(chǎn)物、擴(kuò)增譜帶清晰、特異性強的16條引物供用。利用篩選出的16個引物和優(yōu)化的RAPD反應(yīng)程序和反應(yīng)體系，對來自福建福建農(nóng)林大學(xué)后山的簕竹屬28個個體進(jìn)行全

6、面的RAPD分析并得到多態(tài)性，結(jié)果在全部供試資源中共擴(kuò)增出218條重復(fù)性好，清晰的位點，DNA片段在190bp-3000bp之間，其中多態(tài)性位點共計211個，占96.8％。平均每個引物擴(kuò)增出13.6個片段，13.2個片段具有多態(tài)性。 (3)28個竹種的平均遺傳距離為0.5597，變異幅度為0.2139-0.7647，遺傳距離的平均值及變異幅度均較大，在218個位點中，有211個位點具有多態(tài)性，多態(tài)位點百分比達(dá)到了96.8％，這都

7、說明了它們具有較高的遺傳多樣性。 (4)結(jié)合形態(tài)分類看，大致有這樣的結(jié)果：屬于同一種的變型或栽培型的竹種之間的遺傳距離較小，不同種間的遺傳距離較大。如屬于孝順竹的4個栽培型(小琴絲竹、銀絲竹、鳳尾竹、觀音竹)之間的遺傳距離在0．2139-0．4013，同屬于龍頭竹栽培型的黃金間碧竹和大佛肚竹的遺傳距離為0.3986；而屬于簕竹亞屬的錦竹和屬于孝順竹亞屬的信宜石竹之間的遺傳距離為0．7521。 (5)對采集的28個簕竹屬竹

8、種的DNA擴(kuò)增進(jìn)行RAPD分析，綜合各引物擴(kuò)出的譜帶，得到簕竹屬28個竹種的分子標(biāo)記檢索表，從理論方面為將來從基因型方面對各個竹種的識別直接采用鑒別的引物和區(qū)別帶的位置提供了捷徑，揭示這一竹屬的28個竹種的內(nèi)在聯(lián)系，對從基因型方面進(jìn)行竹種親緣關(guān)系鑒定具有理論上的指導(dǎo)意義。 (6)用16個隨機(jī)引物對28個簕竹屬個體進(jìn)行DNA隨機(jī)擴(kuò)增，所得的RAPD產(chǎn)物顯示了豐富的多態(tài)性，表明簕竹屬種間和種內(nèi)遺傳基礎(chǔ)相當(dāng)復(fù)雜，而RAPD技術(shù)可靈敏地