芍藥屬牡丹組paeoniasectionmoutandc.種間親緣關(guān)系研究：來自adh基因家族的分子證據(jù)

1、西南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文芍藥屬牡丹組（Paeonia section Moutan DC.）種間親緣關(guān)系研究：來自Adh基因家族的分子證據(jù)姓名：林啟冰申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：果樹學(xué)指導(dǎo)教師：周志欽20040501西南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩 上學(xué)位論文 中文摘要本研究 使用S a n g 等( 1 9 9 7 6 ) 設(shè)計的引 物A d h F 2 ( 5 ' - C C T C G C A T A T T T G G T C A C G

2、A A G - 3 ' )和A d h R 2 ( 5 ' - G G G C A C A C C A A C 人 A G T A C T G - 3 ' ) , 用 P C R的方法從 牡丹的總D N A中 擴增A d h基因片段，并用 J M1 0 9大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞對 P C R產(chǎn)物進行克隆，在含氨節(jié)青霉素和X - g a l 的L B 平板上根據(jù)藍(lán)白 反應(yīng)篩選陽 性克隆。挑 取陽 性克隆 用L B

3、液 體培養(yǎng)基在3 7 ' C 培 養(yǎng)1 2小時 ( 過夜) 。采用堿裂解法從菌液中提取質(zhì)粒 D N A.用E c o R! 酶切和 P C R方法對質(zhì)粒D N A進行篩選，并將選取的克隆 用于測序。序列的 測定在A B 1 3 7 7 全自 動測序儀上進行。 用S e g E D 3 . 0 程序?qū)π蛄羞M行了校正， 對校正 后的序列 用C l u s t a I X程序進行對齊，對齊后的序列再加以人工檢查。用得到的序列構(gòu)建基因樹

4、，最后根據(jù)基因樹全面分析牡丹組種間親緣關(guān)系。本研究共測定了 牡丹組7 個種的1 0 個野生居群共1 0 份樣品 的全部A d h l A . A d h 1 B和A d h 2基因 序列， 結(jié)合前人己 報導(dǎo)的牡丹野生種的A d h 基因序列，以 芍藥組和北美芍藥組的種作外類 群， 用P A U P * ( 4 . O b 4 a ) 計算機程序構(gòu)建了 牡丹 組全部8 個種的A M A , A d h I B 和A d

5、h 2 基因樹 ( 最大簡約樹和鄰接樹)， 同時 進行了A d h I A . A d h l B 和A d h 2 基因 序列的 合并 分析。研究結(jié)果顯示， 牡丹組的8個種分為兩個具有9 0 %以 上自 展值支持的單系分支， 分別對應(yīng)S t e m ( 1 9 4 6 ) 根據(jù)形態(tài) 劃分的革質(zhì)花盤亞組 ( S u b s e c t . V a g i n a t a e ) 和肉 質(zhì)花盤亞組( S u b s e c tD e

6、 l a v o y a n a e ) 。 在革質(zhì)花盤亞組內(nèi)的 六個種中，銀 屏牡丹巢湖居群與鳳丹聚在一起， 矮 牡丹、卵葉牡丹以及銀屏牡丹篙 縣居群聚在一起， 紫斑牡 丹與四川牡丹聚在一 起( 自 展值均 > 8 5 % ) ;另外，從A d h 1 B基因樹看圓裂四川牡丹早于滇牡丹與大花黃牡丹聚在一 起并得到很強的支持( MP和N J 樹的自 展值均為 1 0 0 %) 0綜合本文和前人的研究結(jié)果，本論文得出以下結(jié)論:1 、

7、 牡丹組8 個種在基因樹上可根據(jù)親緣關(guān)系 遠(yuǎn)近分成兩個類群， 滇牡丹P d e l a v a y i 和大花黃牡丹 P l u d l o w i i 為一群， 其余的6個種為另一群。 這一結(jié)果與前人根據(jù)形態(tài)將牡丹組分為革質(zhì)花盤亞組 ( S u b s e c t . V a g i n a t a e ) 和肉 質(zhì)花盤亞組 ( S u b s e c t . D e l a v a y a n a e ) 的處理是一致的。2

8、 , 在 革質(zhì) 花 盤 亞 組 中 ， 四 川 牡 丹P d e c o m p o s i t a 和 紫 斑 牡 丹P r o c k i i 構(gòu) 成 親 緣 關(guān) 系 近 的 一個類群: 銀屏 牡丹P . s u f f r u t i c o s a s u b s p . 3 i n p i n g n i u d a n , 鳳丹P . o s t i i , 矮牡丹P j i s h a n e n s i

9、s和卵川 一 牡丹P q i u i 構(gòu)成親緣關(guān)系近的 另一 個類群。3 , A d h基因支持牡丹野生種各種間的如下親緣關(guān)系:( t ) 滇牡丹P d e l a v a y i 和大花黃牡丹P l u d l o w i i 親緣關(guān)系最近;( 2 )四川牡丹P d e c o m p o s i t a 和紫斑牡丹P r o c k i i 親 緣關(guān)系 最近;( 3 ) 銀屏牡丹P s u f r u t i c o