IL-2預(yù)孵育同種異基因淋巴細(xì)胞抑制MHC完全不相合小鼠急性GVHD的實驗研究.pdf

1、目的:建立非清髓性過繼性植入同種異基因淋巴細(xì)胞小鼠的模型,探討小劑量IL-2預(yù)孵育同種異基因淋巴細(xì)胞后對受鼠急性GVHD的影響,以及過繼性植入IL-2預(yù)孵育后的淋巴細(xì)胞的GVT效應(yīng)。
　　 方法:
　　 1、為探索非致死性的非清髓性的預(yù)處理劑量,給予受鼠雌性BALB/C兩種不同劑量137Se TBI預(yù)處理——7Gy和5Gy；
　　 2、將受鼠分為A、B、C、D、E共5組(n=12),給予非致死性非清髓性的預(yù)處理后

2、分別過繼性植入雄性C57BL/6N脾淋巴細(xì)胞5×107、1×107和雄性BALB/C×C57BL/6N→F1脾淋巴細(xì)胞0.5×107、1×107、5×107(個/只)。對存活時間超過21天的受鼠在不同時間點用PCR檢測供者淋巴細(xì)胞嵌合體,觀察受鼠生存時間和急性GVHD的癥狀；
　　 3、受鼠為雌性BALB/C,預(yù)處理為137Se TBI5GY,供鼠為雄性C57BL/6N。每只受鼠均腹腔注射供鼠脾淋巴細(xì)胞3×107個,受鼠分為A(

3、直接植入供鼠淋巴細(xì)胞)、B(植入的淋巴細(xì)胞經(jīng)過終濃度為50 U/ml l的IL-2預(yù)孵育4小時)、C(植入的淋巴細(xì)胞先與滅活的BALB/C脾淋巴細(xì)胞反應(yīng)72小時再植入)、D(植入的淋巴細(xì)胞先經(jīng)過終濃度為50 U/ml的IL-2預(yù)孵育4小時,然后與滅活的BALB/C脾淋巴細(xì)胞混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)72小時再植入)共4組(n=9)。觀察期為60天,觀察受鼠生存時間和急性GVHD的癥狀,死亡受鼠均行肝臟和小腸的病理檢查了解急性GVHD的病理改變情況

4、。觀察期結(jié)束時取每只小鼠脾細(xì)胞檢測嵌合體,取肝臟和小腸行病理檢查,了解急性GVHD的病理改變:
　　 4、受鼠為雌性BALB/C,預(yù)處理為137Se TBI5GY,供鼠為雄性C57BL/6N。受鼠分為兩組,A組為對照組(n=9):僅在受鼠右側(cè)腹股溝種植5×104個4T1乳腺癌細(xì)胞株；B組為實驗組(n=9):受鼠不僅在右側(cè)腹股溝種植5×104個4T1乳腺癌細(xì)胞株,而且還腹腔注射3×107個IL-2預(yù)孵育后的C57BL/6N淋巴細(xì)胞

5、(植入的淋巴細(xì)胞先經(jīng)過終濃度為50 U/ml的IL-2預(yù)孵育4小時,然后與滅活的BALB/C脾淋巴細(xì)胞混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)72小時再植入)。
　　 結(jié)果:
　　 1、56y為非致死性的非清髓性的預(yù)處理劑量；
　　 2、TBI為5Gy的免疫抑制后,在受鼠保留自身造血的情況下,過繼性同種異基因淋巴細(xì)胞可以植活。在MHC完全不相合以及半相合的兩類移植中均有急性GVHD發(fā)生,MHC完全不相合(A組)植活后小鼠可發(fā)生致死性急性

6、GVHD,半相合(E組)急性GVHD明顯減輕。MHC分子半相合的植活率(D組)比完全不相合的(B組)高,植活時間長；在半相合的植入模型中植入的細(xì)胞量越多,植活率越高,植活時間逐漸延長;
　　 3、IL-2(50 U/ml)預(yù)孵育同種異基因淋巴細(xì)胞4小時后,然后與滅活后的BALB/C脾淋巴細(xì)胞混合反應(yīng)72小時,再過繼性植入后其急性GVHD的發(fā)生強(qiáng)度明顯減輕；
　　 4、B組受鼠的4T1乳腺癌細(xì)胞株的發(fā)生時間明顯延長,雖然生

7、存時間有延長,但是沒有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論:TBI為5Gy的免疫抑制后同種異基因淋巴細(xì)胞的過繼性植入可以顯著增加嵌合體陽性比例,并且保留受鼠自身造血?？s小供受者M(jìn)HC分子的差異,適當(dāng)增加供者淋巴細(xì)胞的數(shù)量對獲得穩(wěn)定的同種異基因淋巴細(xì)胞嵌合體以及避免致死性急性GVHD出現(xiàn)具有實際意義。小劑量的IL-2預(yù)孵育同種異基因的淋巴細(xì)胞后,可以明顯減輕過繼性植入后急性GVHD的發(fā)生。其機(jī)制與小劑量IL-2預(yù)孵育異基因淋巴細(xì)胞上調(diào)SOCS