蛋氨酸腦啡肽(MENK)、IL-2、IFN-γ對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞亞群影響比較的研究.pdf

1、前言:
　　 蛋氨酸腦啡肽(Methionine Enkephalin,MENK)是由體內(nèi)腎上腺產(chǎn)生的前激素和前腦腓肽衍生而來(lái),是由酪-甘-甘-苯丙-蛋氨酸殘基構(gòu)成的五肽。蛋氨酸腦啡肽受體:又稱阿片生長(zhǎng)因子受體(Opioidgrowthfactorreceptor,OGFr),經(jīng)典阿片受體可分為μ(mu)、δ(delta)、κ(kappa)等幾種亞型。作用于免疫系統(tǒng)的主要是δ、μ受體,主要表達(dá)在淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和粒細(xì)

2、胞上。MENK與上述受體結(jié)合參與免疫功能的調(diào)節(jié),其主要以自分泌或旁分泌途徑與表達(dá)上述受體的免疫細(xì)胞結(jié)合,可雙向調(diào)控胞內(nèi)cAMP、鈣離子以及蛋白激酶A的水平,通過(guò)影響第二信號(hào)通路而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)。在過(guò)去的研究中,證明了MENK單獨(dú)或與其他細(xì)胞因子(IL-2或IFN-γ)聯(lián)合應(yīng)用能夠增強(qiáng)機(jī)體免疫細(xì)胞的功能,但具體作用機(jī)制尚不清楚,特別是對(duì)淋巴細(xì)胞各亞群的作用,經(jīng)MENK刺激后淋巴細(xì)胞各亞群數(shù)量和活性的變化,至今未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本

3、實(shí)驗(yàn)應(yīng)用現(xiàn)代免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)研究MENK對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響,同時(shí)與IL-2和IFN-γ做出比較分析,特別是DC、NK、NKT、毒性T、γδT及Treg,為應(yīng)用MENK治療惡性腫瘤進(jìn)一步提供理論依據(jù),同時(shí)為腫瘤生物療法提供一種新的途徑。
　　 實(shí)驗(yàn)材料和方法:
　　 一、實(shí)驗(yàn)對(duì)象
　　 15名健康志愿者參加此項(xiàng)研究,其中男4人,女11人,平均年齡26.8歲
　　 二、實(shí)驗(yàn)方法
　　

4、1、密度梯度離心法分離健康志愿者外周血淋巴細(xì)胞;
　　 2、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同處理組淋巴細(xì)胞各亞群的變化情況;
　　 3、半定量RT-PCR檢測(cè)比較各亞群相關(guān)分子的mRNA表達(dá)水平。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 1、流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR檢測(cè)CD8+CD28+T細(xì)胞結(jié)果
　　 各實(shí)驗(yàn)組CD8+CD28+T數(shù)量與對(duì)照組相比均有不同程度增加(p＜0.05,其中MENK組增加最為顯著,與IL-2組和IFN

5、-γ組相比有差異(p＜0.05)。
　　 RT-PCR檢測(cè)了CD8,CD28分子mRNA的表達(dá)水平,結(jié)果顯示MENK組mRNA表達(dá)量明顯增加(p＜0.05)。
　　 2、流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR檢測(cè)γδT細(xì)胞結(jié)果
　　 MENK組和IL-2組γδT數(shù)量與對(duì)照組相比均有不同程度增加(p＜0.05),而IFN-γ組則無(wú)明顯差異,其中MENK組增加最為顯著,與IL-2組和IFN-γ組相比有差異(p＜0.05)。

6、　　 RT-PCR檢測(cè)了γδTCR分子mRNA的表達(dá)水平,結(jié)果顯示MENK組mRNA表達(dá)量明顯增加(p＜0.05)。
　　 3、流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR檢測(cè)NK和NKT細(xì)胞結(jié)果
　　 MENK組NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比,均有明顯增加(p＜0.05),與IL-2組和IFN-γ組相比無(wú)明顯差異。
　　 RT-PCR檢測(cè)了CD3,CD16和CD56分子mRNA的表達(dá)水平,結(jié)果顯示MENK組mRNA表達(dá)量均

7、明顯增加(p＜0.05)。
　　 4、流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR檢測(cè)Treg細(xì)胞結(jié)果
　　 MENK組與對(duì)照組相比,Treg細(xì)胞數(shù)量顯著減少(p＜0.05),與IL-2組和IFN-γ組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 RT-PCR檢測(cè)了CD4,CD25和Foxp3分子mRNA的表達(dá)水平,結(jié)果顯示MENK組Foxp3mRNA表達(dá)量明顯降低(p＜0.05)。
　　 5、流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR檢測(cè)DC細(xì)

8、胞結(jié)果
　　 MENK組DC細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比有明顯增加(p＜0.05)。
　　 RT-PCR檢測(cè)了CD1α分子mRNA的表達(dá)水平,結(jié)果顯示MENK組mRNA表達(dá)量明顯增加(p＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、適宜濃度的MENK能夠促進(jìn)DC、NK、NKT、毒性T、γδT細(xì)胞的增殖
　　 2、適宜濃度的MENK能夠抑制Treg的增殖;
　　 3、在促進(jìn)淋巴細(xì)胞亞群增殖方面,MENK比