版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、研究背景和目的:
缺血性中風(fēng)(ischemic stroke)是一種常見(jiàn)且嚴(yán)重的疾病,其高致殘率和高死亡率,嚴(yán)重危害著人類生命和健康。缺血伴隨著缺氧,缺血缺氧性腦損傷的病理生理機(jī)制極為復(fù)雜,其中涉及的許多相關(guān)基因和蛋白的改變及其復(fù)雜的聯(lián)系至今尚未完全研究清楚。曾經(jīng)有學(xué)者通過(guò)腦缺血預(yù)處理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腦缺血后可以激發(fā)內(nèi)源性神經(jīng)保護(hù),促進(jìn)新的蛋白質(zhì)合成,從而阻止或減弱腦缺血引起的缺血性級(jí)聯(lián)反應(yīng)。鑒于目前對(duì)缺血性中風(fēng)的治療方法有限,溶
2、栓療法受時(shí)間限制,很多神經(jīng)保護(hù)劑沒(méi)有確切療效,因此,尋找新的治療靶點(diǎn)是我們的目標(biāo)。我們的前期工作中發(fā)現(xiàn)細(xì)胞間黏附分子5(ICAM-5)可以阻止由Aβ誘因?qū)е碌腜AJU細(xì)胞凋亡,因此,我們進(jìn)一步研究其在缺血缺氧環(huán)境中是否同樣具有神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制。
研究方法:
1.采用穩(wěn)定表達(dá)常量人ICAM-5蛋白的PAJU-TLN細(xì)胞株和具有NEO抗性且不表達(dá)ICAM-5的PAJU-NEO細(xì)胞株作為神經(jīng)元缺血缺氧培養(yǎng)的細(xì)胞
3、模型,先建立無(wú)血清培養(yǎng)PAJU細(xì)胞模型,觀察ICAM-5蛋白表達(dá)對(duì)PAJU細(xì)胞的作用;然后建立缺血缺氧培養(yǎng)PAJU細(xì)胞模型并驗(yàn)證模型的有效性,進(jìn)一步研究ICAM-5蛋白表達(dá)對(duì)PAJU細(xì)胞的作用。
2.用缺血缺氧作為刺激源,同時(shí)分別對(duì)PAJU-TLN和PAJU-NEO細(xì)胞進(jìn)行不同時(shí)間段刺激,采用四唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)細(xì)胞活力、Hoechst33258細(xì)胞核染色觀察核凋亡、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡,以了解ICAM-5是否在缺
4、血缺氧環(huán)境中具有對(duì)PAJU細(xì)胞的保護(hù)作用。
3.采用蛋白免疫印跡技術(shù)檢測(cè)缺血缺氧對(duì)ICAM-5表達(dá)的影響,以及ICAM-5在缺血缺氧刺激后埃茲蛋白-根蛋白-膜突蛋白,磷脂酰肌醇-3激酶/絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶信號(hào)通路(ERM/PI3K/Akt)中磷酸化蛋白表達(dá)的影響,以了解促進(jìn)細(xì)胞存活的信號(hào)通路是否被激活。
研究結(jié)果:
1.表達(dá)ICAM-5蛋白的PAJU-TLN細(xì)胞在缺血作用中的存活率比較PAJ
5、LJ-NEO細(xì)胞高,在缺血缺氧中的凋亡率比PAJU-NEO減少,表現(xiàn)為細(xì)胞存活率升高和凋亡率降低,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.PAJU細(xì)胞在經(jīng)受較長(zhǎng)時(shí)間缺血缺氧作用后,ICAM-5蛋白的表達(dá)逐漸降低,在無(wú)血清且2%的缺氧環(huán)境中培養(yǎng)至72小時(shí)即完全停止表達(dá)。
3.通過(guò)免疫印記技術(shù)發(fā)現(xiàn),ICAM-5蛋白的表達(dá)使Moesin蛋白的558位蘇氨酸(Thr558)殘基磷酸化而形成活化狀態(tài),經(jīng)缺血缺氧刺激后引起其家族蛋白
6、中的Ezrin蛋白的第567位蘇氨殘基酸(Thr567)和Radixin蛋白的564位蘇氨酸(Thr564)出現(xiàn)磷酸化激活,并由此導(dǎo)致了PI3K蛋白調(diào)節(jié)亞單位p85a的508位酪氨酸殘基(Tyr508,p85a)磷酸化,引起P13K活化,PI3K直接促使Akt蛋白的473位絲氨酸(Ser-473)殘基磷酸化而激活了信號(hào)通路。
4.PI3K特異性抑制劑LY294002不僅下調(diào)PI3K蛋白表達(dá),而且還可以下調(diào)ICAM-5、磷酸
7、化ERM、磷酸化PI3.及磷酸化Akt蛋白的表達(dá),而總ERM、總PI3K及總Akt卻表達(dá)于未經(jīng)LY294002和缺血缺氧處理以及經(jīng)過(guò)LY294002和缺血缺氧處理過(guò)的PAJU細(xì)胞,驗(yàn)證了ERM/PI3K/Akt信號(hào)通路的激活。
研究結(jié)論:
1.我們首次證明了ICAM-5蛋白表達(dá)在缺血缺氧中具有神經(jīng)保護(hù)作用,可以減輕缺血缺氧所致的PAJU細(xì)胞凋亡,促進(jìn)細(xì)胞存活。
2.首次證明缺血缺氧對(duì)ICAM-5
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 細(xì)胞間黏附分子-1和血管細(xì)胞黏附分子-1在滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá).pdf
- 細(xì)胞黏附分子
- 核因子κB在大鼠全腦缺血耐受中的作用及其對(duì)細(xì)胞間黏附分子-1和Bcl-2表達(dá)的影響.pdf
- 腦缺血治療藥物對(duì)細(xì)胞黏附分子表達(dá)的影響.pdf
- 內(nèi)皮細(xì)胞白細(xì)胞黏附分子-1在小梁細(xì)胞的表達(dá)和作用研究.pdf
- 黏附分子在皮肌炎發(fā)病機(jī)制中的免疫介導(dǎo)作用.pdf
- 血管細(xì)胞黏附分子-1在冠心病中作用的臨床研究.pdf
- 缺氧預(yù)處理對(duì)心臟干細(xì)胞在缺血環(huán)境中生存的作用及機(jī)制研究.pdf
- 骨髓基質(zhì)細(xì)胞和黏附分子對(duì)骨髓瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響作用初探.pdf
- 調(diào)節(jié)肺上皮細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞間黏附分子-1的信號(hào)傳導(dǎo)途徑的研究.pdf
- 當(dāng)歸多糖對(duì)小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞黏附分子表達(dá)及其黏附功能的影響.pdf
- TGF-β信號(hào)通路及細(xì)胞黏附分子在非小細(xì)胞肺癌中的研究.pdf
- 細(xì)胞間粘附分子—1及其可溶形式在甲狀腺相關(guān)眼病發(fā)病機(jī)制中的若干作用.pdf
- 可溶性細(xì)胞間黏附分子-1和可溶性血管細(xì)胞黏附分子-1與冠心病的相關(guān)性.pdf
- 細(xì)胞間黏附分子-1介導(dǎo)糖尿病高血糖腦缺血再灌注損傷的作用.pdf
- 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和細(xì)胞間黏附分子1在胸腔積液細(xì)胞中表達(dá)的研究.pdf
- HIF-1α對(duì)細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的初步研究.pdf
- 益腦膠囊對(duì)大鼠腦缺血再灌注后腦組織細(xì)胞間黏附分子表達(dá)的影
- TNF-α,G-CSF及VEGF對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面黏附分子L-選擇素和血管細(xì)胞黏附分子-1表達(dá)影響的研究.pdf
- 細(xì)胞間粘附分子-1與白細(xì)胞在大鼠急性胰腺炎中的作用.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論