青島地區(qū)宮頸上皮內(nèi)瘤變中HPV16 E6和E7多態(tài)性分析.pdf

1、目的:
　　 HPV16基因多態(tài)性在不同的地區(qū)存在著差異，并可能導(dǎo)致HPV的致病性發(fā)生改變。本實(shí)驗(yàn)擬分析宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級(jí)組織中，HPV16主要的致癌基因E6、E7的突變情況，以探討山東青島地區(qū)癌前病患中HPV16 E6和E7基因的主要突變特征與突變型別，為防治宮頸癌提供新的研究思路。
　　 方法與材料:
　　 1.收集51例于青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦科行宮頸冷刀錐切治療的石蠟組織標(biāo)本，病理診斷均為宮頸上皮內(nèi)瘤變

2、Ⅲ級(jí)。這些患者均首次于婦科門(mén)診就診時(shí)通過(guò)高危型HPV分型檢測(cè)。
　　 2.用蛋白酶K法和OMEGA試劑盒提取Siha細(xì)胞與HPV16陽(yáng)性石蠟組織中DNA。
　　 3.把提取得到的DNA作為模版，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得E6和E7完整基因片段。
　　 4.純化得到的基因產(chǎn)物，并進(jìn)行堿基測(cè)序，與Genbank中HPV16 E6、E7標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對(duì)分析，尋找HPV16 E6和E7的改變。
　　 結(jié)果:
　　

3、 1.宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級(jí)中HPV16陽(yáng)性者共33例，共有32例擴(kuò)增出E6、E7全基因片段，其中30例(93.75％)存在堿基突變。
　　 2.本實(shí)驗(yàn)中共檢測(cè)到3種HPV16變異亞型，按比例順序分別為AS型(21/32)、E-P(9/32)型和E(2/32)型。
　　 3.32例擴(kuò)增出E6、E7基因片段的組織中，E6基因共發(fā)現(xiàn)7個(gè)突變位點(diǎn)，其中6種有義突變，其中發(fā)生T178G突變的共有21例。E7基因有11種堿基突變，有