云南省瀾滄江流域乙型腦炎與媒介、宿主和環(huán)境關(guān)系的調(diào)查研究.pdf

1、目的：通過云南省瀾滄江流域不同地理氣候環(huán)境梯度中的蚊類媒介多樣性、重要宿主動物與乙型腦炎關(guān)系的調(diào)查研究，探討它們與發(fā)病率、重要生態(tài)因子和部分宿主之間的相互關(guān)系。 內(nèi)容：（1）瀾滄江流域媒介蚊蟲調(diào)查：在瀾滄江流域不同環(huán)境梯度（經(jīng)度、緯度和海拔）調(diào)查采集蚊類成蟲，經(jīng)分類、計(jì)數(shù)、登記后，凍于液氮保存。（2）瀾滄江流域蚊體乙型腦炎病毒自然帶毒率調(diào)查：對觀察點(diǎn)采集的部分蚊蟲標(biāo)本進(jìn)行研磨，上清液接種組織培養(yǎng)細(xì)胞以分離乙型腦炎病毒，用RT—P

2、CR、免疫熒光實(shí)驗(yàn)等方法進(jìn)行病毒鑒定。（3）瀾滄江流域乙型腦炎血清學(xué)調(diào)查：在各觀察點(diǎn)采集健康人群血清，采用血凝抑制試驗(yàn)方法檢測血清中乙型腦炎抗體。 方法：（1）瀾滄江流域媒介蚊蟲調(diào)查：在云南西部約北緯20°～28°、東經(jīng)97．5°～110°之間和海拔100m～3800m之間的瀾滄江流域區(qū)域內(nèi)，采用重點(diǎn)普查和抽樣調(diào)查相結(jié)合的方法，選擇不同經(jīng)緯度（以每個緯度或經(jīng)度為—水平梯度）、海拔（以每500米海拔高度為—垂直梯度）、地理氣候及植

3、被等梯度環(huán)境內(nèi)的各類型棲境地進(jìn)行蚊蟲媒介物種多樣性及相關(guān)生物學(xué)的調(diào)查取樣。具體的調(diào)查方法：從2007年9月～2008年9月間，以月為—時間梯度，每月一次，采用誘蚊燈逐月、定點(diǎn)對不同環(huán)境梯度內(nèi)的人、畜房進(jìn)行通宵捕捉成蚊，以此觀察不同蚊類的組成、分布等生態(tài)學(xué)習(xí)性。通過不同環(huán)境內(nèi)所獲的蚊蟲標(biāo)本、資料和數(shù)據(jù)進(jìn)行蚊蟲多樣性研究。（2）瀾滄江流域蚊體乙型腦炎病毒自然帶毒率調(diào)查：在蚊類調(diào)查現(xiàn)場，取一定數(shù)量的蚊類成蟲，經(jīng)分類鑒定后分裝，置于液氮罐內(nèi)低溫

4、保存，帶回實(shí)驗(yàn)室（P2或P3實(shí)驗(yàn)室）進(jìn)行乙型腦炎病毒的檢測或分離，蚊蟲標(biāo)本病毒檢測或分離方法主要采取消毒、研磨、離心等處理后接種C6/36細(xì)胞及BHK21組織培養(yǎng)細(xì)胞分離病毒，并RT—PCR、免疫熒光實(shí)驗(yàn)等方法進(jìn)行鑒定。所獲結(jié)果并分別計(jì)算出不同蚊種的自然帶毒率。（3）瀾滄江流域乙型腦炎血清學(xué)調(diào)查：選取瀾滄江流域上游的維西縣、中游的風(fēng)慶縣和景東縣、下游的勐臘縣采集健康人血清，用血凝抑制試驗(yàn)檢測乙型腦炎病毒抗體。 結(jié)果：（1）瀾滄江

5、流域媒介蚊蟲調(diào)查：瀾滄江流域居民點(diǎn)共捕獲蚊蟲86059只，分屬6屬45種（亞種）。結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，北緯24°以南，隨緯度的降低居民區(qū)的蚊類物種多樣性逐漸升高（r=—0．2379），北緯24°以北，隨緯度的升高居民區(qū)的蚊類物種多樣性逐漸降低（r=—0．4114）。1500m以下，隨海拔的降低居民區(qū)的蚊類物種多樣性逐漸升高（r=—0．4508），1500m以上，隨海拔的升高居民區(qū)的蚊類物種多樣性逐漸降低（r=—0．8738）。（2）瀾滄江流域

6、蚊體乙型腦炎病毒自然帶毒率調(diào)查：對4屬9種39批1967只雌性成蚊進(jìn)行了乙型腦炎帶毒率調(diào)查，從三帶喙庫蚊中共分離到5株（ML20、ML21、ML27、ML29、ML32）、從中華按蚊中共分離到1株（ML33）對C6/36細(xì)胞及BHK21細(xì)胞能產(chǎn)生明顯細(xì)胞病變的病毒，經(jīng)間接免疫熒光試驗(yàn)為乙型腦炎病毒（JEV），同時采用乙型腦炎病毒引物對6株JEV進(jìn)行RT—PCR，結(jié)果為陽性，后經(jīng)核酸序列測定分析證實(shí)為乙型腦炎病毒。（3）瀾滄江流域乙型腦炎