云南省瀾滄江流域蚊蟲(chóng)及蚊媒病毒調(diào)查研究.pdf

1、云南省是我國(guó)蚊類區(qū)系和物種分布的核心地帶和關(guān)鍵地區(qū)，也是我國(guó)蚊媒傳染病較多的省份。迄今為止，在云南從蚊蟲(chóng)中分離并已鑒定的病毒包括5個(gè)病毒科11種病毒，包括披膜病毒科甲病毒屬的辛德畢斯病毒、基孔肯雅病毒、蓋塔病毒，黃病毒科黃病毒屬的乙腦病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）、登革病毒(Dengue virus，DENV)，呼腸孤病毒科的云南環(huán)狀病毒(Yunnan orbivirus，YUOV)、Colti病

2、毒、Kadipiro病毒、版納病毒(Banna virus，BAV)，細(xì)小病毒科濃核病毒屬的濃核病毒，布尼亞病毒科布尼亞病毒屬的巴泰病毒。在云南已從15種蚊蟲(chóng)中分離到乙腦病毒。瀾滄江在云南省境內(nèi)1247km，縱貫云南南北。流域面積約90000km2，是我國(guó)蚊類區(qū)系和蚊種分布的核心地帶和關(guān)鍵地區(qū)之一。以往開(kāi)展蚊蟲(chóng)及蚊媒病毒的調(diào)查多集中于滇西南邊境地區(qū)，在滇西北地區(qū)開(kāi)展的調(diào)查較少。隨著全球氣候變曖、人口流動(dòng)增加、人們的生產(chǎn)生活方式改變以及瀾

3、滄江—湄公河國(guó)際航運(yùn)的開(kāi)通，有必要對(duì)云南省瀾滄江流域蚊蟲(chóng)分布及其與疾病的關(guān)系進(jìn)行系統(tǒng)的調(diào)查研究。
　　2007-2009年，在云南省瀾滄江上、中、下流域共選擇10個(gè)居民點(diǎn)進(jìn)行蚊蟲(chóng)分布調(diào)查，在蚊蟲(chóng)密度高峰季節(jié)，采用誘蚊燈法在畜圈和人房?jī)?nèi)進(jìn)行夜間捕蚊。并于2010年，在下游地區(qū)村寨竹林采集伊蚊。對(duì)采集的蚊蟲(chóng)標(biāo)本用白紋伊蚊C6/36細(xì)胞進(jìn)行病毒分離、分子生物學(xué)鑒定和系統(tǒng)進(jìn)化分析。同時(shí)收集疑似病人血清和腦脊液標(biāo)本進(jìn)行病毒分離和分子生物學(xué)鑒

4、定。
　　調(diào)查結(jié)果顯示，瀾滄江流域居民點(diǎn)畜圈共采集到8屬40種共計(jì)112344只蚊蟲(chóng)。其中構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是三帶喙庫(kù)蚊(80.26％)、中華按蚊(8.35％)、環(huán)帶庫(kù)蚊(5.41％)和紋腿庫(kù)蚊(2.42％)，其余36種蚊蟲(chóng)的構(gòu)成比均小于1.00％。在人房中共采集到7屬32種4427只蚊蟲(chóng)，蚊蟲(chóng)構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是三帶喙庫(kù)蚊(35.71％)、中華按蚊(27.51％)、紋腿庫(kù)蚊(10.68％)、騷擾阿蚊(3.55％)。在

5、上游地區(qū)畜圈中共采集到6屬20種蚊蟲(chóng)，其中構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是紋腿庫(kù)蚊(36.47％)、三帶喙庫(kù)蚊(30.63％)、中華按蚊(14.85％)和昆明按蚊(11.63％)。人房中共采集到4屬6種蚊蟲(chóng)，構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是騷擾阿蚊(29.41％)、致倦庫(kù)蚊(23.53％)、中華按蚊(17.65％)、多斑按蚊和白胸庫(kù)蚊(11.76％);在中游地區(qū)畜圈共采集到6屬28種蚊蟲(chóng)，其中構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是三帶喙庫(kù)蚊(84.03％)、中

6、華按蚊(6.67％)、環(huán)帶庫(kù)蚊(5.49％)和紋腿庫(kù)蚊(1.26％)。人房中共采集到5屬20種蚊蟲(chóng)，構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是三帶喙庫(kù)蚊(36.15％)、中華按蚊(29.09％)、紋腿庫(kù)蚊(12.15％)、致倦庫(kù)蚊(11.82％);在下游地區(qū)畜圈共采集到7屬35種蚊蟲(chóng)，其中構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是三帶喙庫(kù)蚊(77.15％)、中華按蚊(12.53％)、環(huán)帶庫(kù)蚊(5.76％)和致倦庫(kù)蚊(0.90％)。人房中共采集到6屬25種蚊蟲(chóng)，排在前四

7、位的蚊蟲(chóng)依是三帶喙庫(kù)蚊(33.59％)、致倦庫(kù)蚊(19.69％)、中華按蚊(16.60％)、環(huán)帶庫(kù)蚊(8.49％)。
　　對(duì)云南瀾滄江流域10個(gè)縣采集到的共14706只193組蚊蟲(chóng)標(biāo)本進(jìn)行病毒分離，共獲得55株有細(xì)胞病變的病毒分離物，對(duì)11份腦脊液標(biāo)本、23份發(fā)熱病人血清進(jìn)行病毒分離，獲得1株有細(xì)胞病變的病毒分離物。
　　采用特異引物或通用引物對(duì)49株分離物進(jìn)行RT-PCR鑒定，有40株分離物得到鑒定，仍有9株為未知分離物。

8、40株分離物中包括5科（黃病毒科、披膜病毒科、呼腸孤病毒科、Toii病毒科、Mesoniviridae病毒科）8種病毒（乙腦病毒11株、庫(kù)蚊黃病毒6株、伊蚊黃病毒6株、蓋塔病毒5株、版納病毒3株、云南環(huán)狀病毒5株、Toti病毒6株、Alphamesonivirus1樣病毒1株），其中蚊蟲(chóng)黃病毒、Toti病毒、Alphamesonivirus1樣病毒為云南首次分離到。40株分離物中，有2株同時(shí)檢測(cè)到BAV和Toti病毒、1株同時(shí)檢測(cè)到庫(kù)蚊

9、黃病毒和Toti病毒。8種病毒主要來(lái)自三帶喙庫(kù)蚊、中華按蚊及白紋伊蚊。從三帶喙庫(kù)蚊中分離到7種病毒（JEV、BAV、YUOV、GETV、Alphamesonivirus1樣病毒、庫(kù)蚊黃病毒、Toti病毒），從中華按蚊中分離到3種病毒（JEV、GETV、庫(kù)蚊黃病毒）。首次從老撾輸入病例血清標(biāo)本中分離到1株登革2型病毒。
　　11株JEV的蚊蟲(chóng)采集地區(qū)分布在云南瀾滄江流域的上、中、下游地區(qū)，瀾滄江上、中、下游地區(qū)三帶喙庫(kù)蚊乙腦病毒的最

10、低感染率分別為24.63/萬(wàn)、7.15/萬(wàn)和9.02/萬(wàn)。新分離JEV的外膜蛋白(E)基因核苷酸相似性為98.0％～100.0％，氨基酸同源性為99.8％～100.0％，與我國(guó)乙腦減毒活疫苗株SA14-14-2的核苷酸相似性為86.1％～86.9％，氨基酸相似性為96.8％～97.2％。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示，新分離10株JEV均屬于基因Ⅰ型。
　　從瀾滄江上、中、下游地區(qū)采集的三帶喙庫(kù)蚊、中華按蚊和白紋伊蚊及未分類伊蚊中鑒定到12株黃

11、病毒。對(duì)12株黃病毒部分非結(jié)構(gòu)蛋白5(NS5)基因進(jìn)行進(jìn)化分析，庫(kù)蚊和按蚊與伊蚊分離到的病毒分別位于不同的分枝，庫(kù)蚊和按蚊中分離到的病毒與庫(kù)蚊黃病毒(Culex flavivirus，CxFV)進(jìn)化關(guān)系相近，而從伊蚊中分離到的黃病毒與CFA病毒(Cell fusing agent virus，CFA)和Kamiti河病毒(Kamiti River virus，KRV)相近，但位于不同分枝中。
　　在瀾滄江中游地區(qū)采集的三帶喙庫(kù)蚊中

12、首次分離到6株Toti病毒。對(duì)該病毒編碼RNA依賴的RNA聚合酶基因的部分氨基酸進(jìn)行進(jìn)化分析顯示，新分離Toti病毒和尚未分類的病毒Omono River virus AK4株和ToV-TJ株同在一個(gè)進(jìn)化分支。屬于Totivirus病毒科尚未分類病毒。
　　在瀾滄江中游地區(qū)采集的三帶喙庫(kù)蚊中首次分離到1株Alphamesonivirus1樣病毒，命名為NDiV-NJ8-09。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)顯示，新分離株NDiV-NJ8-09與NDiV

13、02VN178和Cavally virus(CAVV)共同位于同一進(jìn)化分枝，關(guān)系最近，屬于套式病毒目(order Nidovirales) Mesoniviridae病毒科。
　　在瀾滄江中游地區(qū)南澗縣采集的三帶喙庫(kù)蚊中鑒定出3株BAV，在瀾滄江下游地區(qū)采集的三帶喙庫(kù)蚊中鑒定到5株YUOV，在瀾滄江上游和下游采集的三帶喙庫(kù)蚊和中華按蚊中鑒定到5株GETV。經(jīng)BLAST比對(duì)顯示，分別與以往在云南分離到的相應(yīng)病毒具有很高的相似性。

14、r>　　對(duì)新分離的登革病毒MLDENV-09株E基因核苷酸序列進(jìn)行進(jìn)化分析，結(jié)果顯示該病毒株位于2型登革病毒亞洲基因Ⅰ型拓?fù)淙褐?。與2006年泰國(guó)株D2/Thailand/0606aTw的E基因核苷酸相似性為99.6％。
　　本研究首次在云南省瀾滄江流域系統(tǒng)地進(jìn)行了蚊蟲(chóng)和蚊媒病毒的流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果提示云南省瀾滄江流域不僅存在蚊種的多樣性分布，也同時(shí)存在蚊媒病毒的多樣性。具體得出以下結(jié)論:
　　1.三帶喙庫(kù)蚊和中華按蚊在瀾滄

15、江上、中、下游地區(qū)畜圈中均是優(yōu)勢(shì)蚊種。三帶喙庫(kù)蚊和中華按蚊是瀾滄江中、下游地區(qū)人房中的優(yōu)勢(shì)蚊種。該地區(qū)蚊蟲(chóng)種類從高緯度地區(qū)向低緯度地區(qū)逐漸增多。
　　2.三帶喙庫(kù)蚊是自然感染病毒種類最多的蚊種，從三帶喙庫(kù)蚊中分離到7種病毒（JEV、BAV、YUOV、GETV、Alphamesonivirus1樣病毒、庫(kù)蚊黃病毒、Toti病毒）。其次，從中華按蚊中分離到3種病毒（JEV、GETV、庫(kù)蚊黃病毒）。本次調(diào)查提示瀾滄江流域居民點(diǎn)廣泛存在蟲(chóng)

16、媒病毒性疾病的媒介。
　　3.在云南首次從三帶喙庫(kù)蚊中分離到蚊蟲(chóng)黃病毒、Toti病毒和Alphamesonivirus1樣病毒，它們的生物學(xué)性狀與人類疾病關(guān)系需進(jìn)一步研究。
　　4.在瀾滄江中游地區(qū)分離到BAV，結(jié)合以往調(diào)查數(shù)據(jù)，提示BAV在整個(gè)瀾滄江流域均有分布。JEV在瀾滄江流域廣泛分布。由于這兩種病毒與人類疾病關(guān)系密切，提示應(yīng)加強(qiáng)居民點(diǎn)蚊蟲(chóng)媒介控制措施，以確保居民健康。
　　5.GETV是導(dǎo)致家畜疾病的病原，本次