番茄和辣椒翻譯起始因子4E相關(guān)基因的克隆與分析.pdf

1、植物病毒是導(dǎo)致糧食、油料、蔬菜、果樹、花卉產(chǎn)量下降和品質(zhì)變劣的重要原因，番茄和辣椒是我國重要的蔬菜作物，在生產(chǎn)上嚴(yán)重遭受植物病毒病的侵害，造成生產(chǎn)上的損害。隨著植物翻譯起始因子的深入研究，植物抗病毒研究將面臨新的課題。病毒侵染寄主植物并在植物體內(nèi)進(jìn)行自我復(fù)制和增殖需要借助寄主自身蛋白質(zhì)合成機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)真核翻譯起始因子4E在植物抗病毒中起作用，番茄和辣椒中eIF4E和eIf(iso)4E的基因都對馬鈴薯Y病毒屬病毒有抗性。 通過

2、植物基因工程途徑，干擾病毒利用植物mRNA翻譯蛋白質(zhì)的過程，可抑制病毒在寄主植物內(nèi)的復(fù)制和增殖，不僅可獲得抗病毒植物材料，而且可加深對植物-病毒互作分子機(jī)理的認(rèn)識。本研究通過克隆真核翻譯起始因子4E相關(guān)基因，利用基因失活和正義表達(dá)順式調(diào)控植物自身eIF4E和eIF(iso)4E表達(dá)，提高植物對病毒的抗性，探討真核翻譯起始因子4E相關(guān)基因介導(dǎo)的抗病毒特性的作用機(jī)理。 1.從番茄品種“中蔬五號”中克隆了真核翻譯起始因子4E編碼基因。

3、分析表明，番茄eIF4E基因全長cDNA長696bp，該克隆片段含有長687bp的開放讀碼框，編碼228個氨基酸，與報導(dǎo)的AY723735核酸序列同源性為98％，氨基酸序列同源性為100％。 2.構(gòu)建了番茄eIF4E正義表達(dá)載體及番茄eIF4E反義抑制表達(dá)載體。 3.以番茄品種“中蔬五號”為受體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法用番茄eIF4E正義載體進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，獲得番茄正義表達(dá)載體卡那霉素抗性植株13株，番茄eIF4E反義抑制表

4、達(dá)載體卡那霉素抗性植株4株。 4.從辣椒品種“蘇椒5號”中克隆辣椒的真核翻譯起始因子4E編碼基因。經(jīng)分析表明，辣椒eIF4E基因全長cDNA長875bp,克隆片段含有長687bp的開放讀碼框，編碼228個氨基酸，與報導(dǎo)的AF521963核酸序列同源性為100％，氨基酸序列同源性為100％。 5.構(gòu)建了辣椒eIF4E正義表達(dá)載體及辣椒eIF4E反義抑制表達(dá)載體。 6.從番茄品種“中蔬五號”中克隆了番茄eIF(iso

5、)4E編碼基因。番茄eIF(iso)4E基因全長cDNA長840bp，克隆片段含有長603bp的開放讀碼框，編碼200個氨基酸，與報導(dǎo)的BT014561核酸序列同源性為99％，氨基酸序列同源性為100％。 7.構(gòu)建了番茄eIF(iso)4E正義表達(dá)載體及番茄eIF(iso)4E反義抑制表達(dá)載體。 8.以番茄品種“中蔬五號”為受體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法用番茄eIF(iso)4E正義表達(dá)載體和番茄eIF(iso)4E反義抑制