兩種DNA指紋圖譜技術(shù)在分枝桿菌鑒定中的應(yīng)用研究.pdf

1、廣東醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文兩種DNA指紋圖譜技術(shù)在分枝桿菌鑒定中的應(yīng)用研究姓名：唐曙明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：何林周克元20050501兩種DNA指紋圖譜技術(shù)在分枝桿菌鑒定中的應(yīng)用研究中文摘要目的基于脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PulsedfieldGelElectrophoresis，PFGE))及聚類(lèi)分析，建立用于分枝桿菌鑒定的PFGE方法；通過(guò)PCR和RFLP(restrictionfragmentlengthpolymo

2、rphism)分析，建立鑒定分枝桿菌的PRA(PCR—restrictionfragmentlengthpolymorphismanalysis，PRA)方法，為早期診斷結(jié)核(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)引Ie結(jié)核分枝桿菌(non—tuberculousmycobacteria，NTM)病提供新的有力工具。方法1用傳統(tǒng)鑒定法鑒定78株臨床分枝桿菌和16株分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株。2。用氣相色譜法鑒定78株l盜床分

3、枝桿菌和16株分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株。，394株分枝桿菌經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化、PFGE、溴化乙錠染色處理后，以GelDoc2000凝膠成像儀成像。對(duì)菌株的PFGE模式進(jìn)行聚類(lèi)分析，用ROC曲線(relativeoperatingcharacteristiccurve)確定菌種判定閏值，建立用于分枝桿菌鑒定的PFGE法。以傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法為“金標(biāo)準(zhǔn)”，以氣相色譜法為對(duì)照，對(duì)PFGE做方法學(xué)評(píng)價(jià)。4設(shè)計(jì)分枝桿菌屬特異性通用引物，通過(guò)PCR擴(kuò)增和DNA

4、測(cè)序得到不同分枝桿菌的rpoB基因序列數(shù)據(jù)，用生化軟件比較各序列問(wèn)的差異，并以此為基礎(chǔ)，選擇合適的限制性內(nèi)切酶，通過(guò)RFLP分析建立鑒定分技桿菌的PRA方法。結(jié)果1在94株分枝桿菌中，傳統(tǒng)鑒定法鑒定宥30株為NTM；56株為人結(jié)核分枝桿菌；8株為牛結(jié)核分枝桿菌。在56株人結(jié)核分枝桿菌中有5株耐利福平(rifampin，RIF)。2，氣相色譜法鑒定94株分枝桿菌中有28株為NTM；66株為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(Mycobacteriumtu