結(jié)核分枝桿菌三種抗原的制備和鑒定.pdf

1、目的：
　　結(jié)核病（tuberculosis,TB）是嚴(yán)重危害我國(guó)和全球人類(lèi)健康的重要公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。目前，卡介苗(BCG)仍是用于人類(lèi)結(jié)核病預(yù)防的唯一疫苗。它能夠有效預(yù)防嬰幼兒結(jié)核性腦膜炎和粟粒性肺結(jié)核等的發(fā)生，但對(duì)成人肺結(jié)核的保護(hù)效果不穩(wěn)定、且不能阻止?jié)摲腥窘Y(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，M.tb）的再激活。主要原因在于：從牛型分枝桿菌(M. bovis)減毒制備BCG的過(guò)程中，重要毒力

2、基因的缺失的同時(shí)，導(dǎo)致BCG誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞反應(yīng)能力下降；BCG免疫機(jī)體對(duì)潛伏M.tb的相關(guān)抗原僅有弱或無(wú)應(yīng)答。國(guó)內(nèi)外學(xué)者正在進(jìn)行新型候選疫苗的研究。已報(bào)道的新型候選疫苗，主要是以M.tb活躍生長(zhǎng)繁殖階段表達(dá)的抗原為基礎(chǔ)構(gòu)建的，因此可能與BCG存在同樣缺陷，即無(wú)法有效清除潛伏感染的M.tb。因此，在新型候選疫苗的研制中，潛伏相關(guān)抗原的作用愈來(lái)愈被重視。目前通過(guò)基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)等技術(shù)發(fā)現(xiàn)了與潛伏M.tb感染相關(guān)的重要調(diào)節(jié)系統(tǒng)DosR（

3、活化DosR調(diào)節(jié)系統(tǒng)引起表達(dá)的抗原Rv2623、Rv2626c）和持續(xù)感染期的代謝調(diào)節(jié)基因PhoY2。本研究擬在E.coli中表達(dá)純化Rv2623、Rv2626c和PhoY2，并選用中國(guó)人群，通過(guò)全血IFN-γ釋放試驗(yàn)（Whole blood IFN-γrelease assay,WBIA）對(duì)這三種抗原的免疫原性做初步分析，篩選和驗(yàn)證這些抗原是否可以用于中國(guó)新型TB疫苗的研制，為之后新型疫苗的研發(fā)奠定工作基礎(chǔ)。
　　方法：

4、　　1、分別構(gòu)建重組質(zhì)粒pET2623、pET2626c和pETPhoY2；
　　2、重組蛋白rRv2623、rRv2626c和rPhoY2的表達(dá)、純化及驗(yàn)證；
　　3、結(jié)核感染者和非感染對(duì)照者的篩查和招募；
　　4、重組蛋白刺激受試者全血并檢測(cè)刺激后血漿中IFN-γ含量；
　　5、分析各蛋白刺激 TB感染人群和非感染人群產(chǎn)生的IFN-γ水平的差異以及三種蛋白刺激TB感染人群產(chǎn)生的IFN-γ水平的差異；
　

5、　結(jié)果：
　　1、分別成功構(gòu)建、表達(dá)并純化了rRv2623、rRv2626c和rPhoY2蛋白；
　　2、51例受試者被招募，包括結(jié)核感染者28例、非感染對(duì)照者23例；
　　3、重組蛋白rRv2623、rRv2626c和rPhoY2均具有較好的免疫原性，分別刺激TB感染人群產(chǎn)生的IFN-γ水平為724.32pg/ml、410.20pg/ml和562.01pg/ml，均顯著高于非感染人群（P<0.05）。
　　結(jié)論