慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激對大鼠海馬自噬作用和HMGB1-TLR4通路的影響.pdf

1、目的：
　　1.觀察慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激（CUMS）對大鼠海馬自噬作用和HMGB1/TLR4通路的影響。2.探討大鼠海馬自噬水平及HMGB1/TLR4通路活性與學(xué)習(xí)記憶能力下降的關(guān)系。3.揭示CUMS抑郁癥大鼠模型學(xué)習(xí)記憶能力下降的可能機制。
　　方法：
　　健康、雄性 Wistar大鼠60只，隨機分為對照組與慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激(chronic unpredictable mild stress CUMS)組，每組3

2、0只。對照組不做應(yīng)激處理， CUMS組參照文獻(xiàn)報道方法建立 CUMS抑郁癥大鼠模型。各組大鼠在應(yīng)激前0周及應(yīng)激期間每周進(jìn)行1次行為學(xué)檢測，檢測項目：Open-Field實驗、蔗糖偏嗜度實驗、Morris水迷宮實驗。各組大鼠在3個時間點上（應(yīng)激前0周、應(yīng)激1周后、應(yīng)激4周后）被分批處死，每次每組10只，收集腦組織，HE染色觀察海馬CA1區(qū)組織形態(tài)學(xué)改變，TUNEL染色觀察海馬CA1區(qū)細(xì)胞凋亡情況，透射電鏡觀察海馬CA1區(qū)自噬體數(shù)量，Wes

3、tern-Blot法分別檢測大鼠海馬CA1區(qū)HMGB1、TLR4、Myd88及Beclin1蛋白的表達(dá)，免疫組化檢測海馬CA1區(qū)TLR4、LC3Ⅱ（微管相關(guān)蛋白輕鏈3）的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　（1）造模情況：應(yīng)激4周后與對照組比較，CUMS組大鼠Open-Field實驗得分、蔗糖水消耗量均明顯降低，逃避潛伏期顯著延長，學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降。
　　（2）病理學(xué)檢測結(jié)果：HE染色結(jié)果顯示應(yīng)激4周后CUMS組海馬CA1區(qū)細(xì)

4、胞數(shù)目與對照組比較明顯減少，細(xì)胞周圍間隙增大，細(xì)胞大小不一致，排列紊亂。TUNEL染色觀察到應(yīng)激1周后CUMS組海馬CA1區(qū)凋亡細(xì)胞與對照組比較稍有增多，而應(yīng)激4周后CUMS組海馬CA1區(qū)出現(xiàn)了大量凋亡細(xì)胞；電鏡觀察結(jié)果顯示應(yīng)激1周后CUMS組大鼠海馬CA1區(qū)自噬體數(shù)目與對照組比較即明顯增加，應(yīng)激4周后自噬體數(shù)目增多更為顯著。
　　（3）Western-Blot檢測結(jié)果：應(yīng)激4周后CUMS組HMBG1、TLR4及Myd88的表達(dá)量

5、均顯著高于對照組(1.08±0.12 VS0.51±0.08，P<0.05)、(1.13±0.14 VS0.52±0.04，P<0.05)及(1.18±0.11 VS0.53±0.09，P<0.05)；與對照組比較，應(yīng)激1周后 CUMS組 Beclin1蛋白的表達(dá)即明顯上升(0.90±0.13 VS0.47±0.06， P<0.05)。
　?。?）免疫組化結(jié)果：應(yīng)激4周后CUMS組TLR4的表達(dá)明顯增加，與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意

6、義(1.31±0.21 VS0.63±0.08，P<0.05）；應(yīng)激1周后CUMS組LC3Ⅱ的表達(dá)明顯升高，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(12.45±3.21 VS4.05±2.13，P<0.05），應(yīng)激4周后 CUMS組LC3Ⅱ的表達(dá)進(jìn)一步升高，顯著高于對照組(25.41±5.43 VS5.08±1.50，P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、CUMS能激活大鼠海馬CA1區(qū)HMGB1/TLR4信號通路。
　　2、大鼠