逍遙散干預慢性溫和性不可預知應激大鼠盲腸菌群及組織研究.pdf

1、抑郁癥是一種常見的精神障礙性疾病，臨床表現(xiàn)復雜，但由于其發(fā)病誘因較多，發(fā)病機理還未得到明確的闡釋。流行病學調查揭示，抑郁癥患者不僅表現(xiàn)出心理障礙，多數(shù)還伴有腸易激綜合癥和功能性消化不良等胃腸功能障礙，然而，現(xiàn)有基于神經(jīng)遞質的理論假說并不能夠解釋這種現(xiàn)象。為闡明抑郁癥的發(fā)病機理，尋找新思路和新方法成為迫切需要解決的問題。而作為機體重要的環(huán)境因子，腸道菌群在胃腸功能方面發(fā)揮著重要作用，已成為國際上研究疾病的新熱點。因此，本論文從腸道菌群的角

2、度探討其與抑郁癥發(fā)生的關系。
　　本論文重點圍繞抑郁狀態(tài)下的腸道菌群開展以下研究:①通過慢性溫和性不可預知應激(chronic unpredictable mild stress，CUMS)結合孤養(yǎng)的方法，建立CUMS抑郁模型，并采用體重、行為學指標、糖水偏愛率等參數(shù)，評價模型是否復制成功;②通過優(yōu)化腸道菌群樣品前處理方法、基因組DNA提取方法和ERIC-PCR擴增條件，建立適于分析腸道菌群的ERIC-PCR方法，比較腸道不同部位

3、的菌群多態(tài)性，篩選合適的研究部位，并分析CUMS抑郁模型及藥物干預后該部位菌群結構是否發(fā)生改變;③通過優(yōu)化16S rDNA PCR擴增條件，建立適于分析上述部位菌群的PCR-DGGE指紋圖譜，回收CUMS抑郁模型及藥物干預后有差異的條帶，通過序列測定技術和數(shù)據(jù)庫比對，尋找并鑒定引起差異的菌種;④采用常規(guī)石蠟法和RT-PCR技術，分析CUMS抑郁模型及藥物干預后腸組織形態(tài)學特征及炎癥應答;⑤采用GC-MS技術，比較CUMS抑郁模型及藥物干

4、預后腸組織化學成分的變化。
　　結果表明:①與正常對照組相比，模型組大鼠體重顯著降低、行為學數(shù)據(jù)顯著改變以及糖水偏愛率顯著降低，說明CUMS抑郁模型成功復制;且逍遙散和鹽酸氟西汀具有顯著的抗抑郁效果。此外，模型組大鼠盲腸還觀察到非正常的表現(xiàn)，如重量增加、盲腸指數(shù)升高等，而逍遙散干預能夠糾正這些表現(xiàn)。②發(fā)現(xiàn)盲腸菌群多態(tài)性最顯著，可作為研究部位;分析ERIC-PCR指紋圖譜發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比，模型組的ERIC-PCR指紋圖譜發(fā)生顯

5、著改變，給藥組則有明顯恢復;③與正常對照組相比，模型組的PCR-DGGE指紋圖譜有明顯改變，但給藥組表現(xiàn)出不同的變化趨勢，測序結果表明Lachnospiraceae bacterium、Lactobacillus animali、Burkholderialesbacterium和Lactobacillus reuteri改變最為明顯。④正常對照組盲腸無明顯異常改變。模型組盲腸組織有所改變，但無明顯可見的炎性細胞浸潤。給藥組均有不同程度的

6、改善。⑤與正常對照組相比，與炎癥相關各基因在模型組均表達上調;逍遙散和鹽酸氟西汀干預后，各基因均有不同程度的表達下調。⑥與正常對照組相比，模型組盲腸組織的化學成分發(fā)生顯著改變，但給藥組則表現(xiàn)出不同的變化特點，沒有顯著的回調趨勢。
　　綜上所述，本文建立了適于分析抑郁動物腸道菌群的ERIC-PCR和PCR-DGGE方法，發(fā)現(xiàn)慢性溫和性不可預知應激能夠引起機體腸道菌群及腸道組織形態(tài)、組織化學及與炎癥相關基因表達發(fā)生明顯改變，其中盲腸變