九節(jié)龍皂苷Ⅰ對多種人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系自噬活性增強作用的體外研究.pdf

1、目的：
　　探討九節(jié)龍皂苷Ⅰ（Ardipusilloside I，ADSⅠ）對多種人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系自噬活性的增強作用。
　　方法：
　　培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤U87MG、U251MG、U373MG、SHG-44MG細(xì)胞系，隨機分為二甲基亞砜（Dimethyl sulfoxide，DMSO）對照組和ADSⅠ治療組。采用甲基噻唑基四唑法（Methyl thiagolyl tetragolium，MTT）檢測不同劑量ADSⅠ對四種典

2、型人膠質(zhì)瘤增殖的影響；透射電鏡（Transmission electron microscopy，TEM）觀察四種典型人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)變化；免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC-3的表達(dá)變化；Western blot檢測自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC-3的表達(dá)水，流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測ADSⅠ對U373MG細(xì)胞周期和凋亡的作用；自噬抑制劑氯喹（Chloroquine，CQ

3、）對ADSⅠ介導(dǎo)的U373MG細(xì)胞自噬活性的作用。
　　結(jié)果：
　　MTT法檢測顯示：ADSⅠ可明顯抑制四種典型人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長，呈現(xiàn)時間-劑量依賴性。TEM可以觀察到細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的典型自噬小體特征，包括成核、自噬體形成等。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示：ADSⅠ作用于四種典型人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞24 h后，自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC-3均在胞漿中高表達(dá)，并隨ADSⅠ藥物濃度的增加，自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC-3陽性細(xì)胞

4、率也隨之增高。Western-blot結(jié)果提示：ADSⅠ能增強四種典型人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC-3的表達(dá)水平，并且隨ADSⅠ藥物濃度增加，表達(dá)增高；FCM結(jié)果表明，3.8 mg/L的ADSⅠ顯著阻滯U373MG細(xì)胞周期的G2/M相，低高濃度ADSⅠ顯著提高U373MG的凋亡和壞死細(xì)胞術(shù)；自噬抑制實驗表明，CQ可以顯著減弱ADSⅠ對U373MG細(xì)胞存活率的抑制作用。
　　結(jié)論：
　　ADSⅠ能夠抑制