順鉑對替尼泊甙殺傷小細胞肺癌細胞的影響.pdf

1、河北醫(yī)科大學碩士學位論文順鉑對替尼泊甙殺傷小細胞肺癌細胞的影響姓名：翟麗東申請學位級別：碩士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學指導教師：閻蘊力20050301中文摘要乙醇洗滌后真空晾千。加入20川TE溶解DNA1.5%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色(0.5mgml)紫外光下觀察照相采用RTPCR法檢測TopoIIa和TopoIIB及Spl的表達與藥物作用之關系:用Trizol法提取細胞總RNA，采用隨機引物、AMV逆轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA，擴增產(chǎn)物在1.

2、8%瓊脂糖凝膠上進行電泳(75V50分鐘)，EB染色，應用讀膠儀讀取各條帶產(chǎn)物的光密度值并照相。結(jié)果:MTT法測定CDDP的血漿峰濃度與VM26各濃度合用，兩藥有明顯的協(xié)同效應。AOEB雙熒光染色觀察細胞活率結(jié)果:活細胞被AO染成綠色，中晚期凋亡細胞或死細胞被EB染成橘紅色或紅色。分別計算各組細胞活率，結(jié)果表明，CDDP與VM26合用與藥物單獨相比，細胞活率明顯降低。Hoechst33258熒光染色觀察細胞凋亡率結(jié)果:活細胞核界限清晰，

3、圓形或橢圓形，飽滿，呈均勻藍綠色熒光，染色質(zhì)分布均勻。凋亡細胞核呈顆粒團狀分布，核縮小、碎裂形成多個碎片。分別計算各組細胞凋亡率，結(jié)果表明，CDDP與VM26合用與藥物單獨相比，細胞凋亡率明顯增加。DNA斷裂條帶瓊脂糖凝膠電泳顯示:各用藥組均可引起DNA斷裂，兩藥合用與兩藥單用相比DNA損傷程度增加。RTPCR檢測TopoIIa和TopoIIB及Spl的表達:H446細胞經(jīng)VM26單獨作用24小時后，TopoIIa和TopoIIBmRN