厄洛替尼增強(qiáng)CIK細(xì)胞對(duì)肺腺癌HCC827細(xì)胞的殺傷.pdf

1、背景:
　　肺癌是癌癥死亡的最主要原因。傳統(tǒng)的化療療效已達(dá)到了一個(gè)平臺(tái)期。近年來(lái)分子靶向藥物治療已成為晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的主要治療手段，特別是表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)突變的患者，能夠明顯從EGFR酪氨酸激酶抑制劑(TKI)中獲益。然而大部分患者治療一段時(shí)間后會(huì)出現(xiàn)臨床耐藥。近年來(lái)EGFR家族藥物聯(lián)合細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷(CIK)細(xì)胞的抗腫瘤治療引起了人們的關(guān)注，探討EGFR-TKI對(duì)CIK細(xì)胞殺傷EGFR突變?nèi)朔蜗侔?/p>

2、HCC827細(xì)胞的影響及分子機(jī)制，可為NSCLC的治療提供新的思路。
　　目的:
　　觀察EGFR-TKI厄洛替尼及EGFR下游主要分子對(duì)人肺腺癌HCC827細(xì)胞表面NKG2D配體表達(dá)的影響，探討厄洛替尼作用于人肺腺癌HCC827細(xì)胞后，CIK細(xì)胞對(duì)HCC827細(xì)胞殺傷活性的變化。
　　方法:
　　1)分別以終濃度為5μmol/L和10μmol/L的厄洛替尼處理HCC827細(xì)胞后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面NKG2

3、D配體主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類鏈相關(guān)蛋白(MIC)A、B及UL16結(jié)合蛋白(ULBP)1、2、3表達(dá)的變化。
　　2) HCC827細(xì)胞培養(yǎng)24h后，分別以EGFR下游分子磷脂酰肌醇3-激酶抑制劑LY294002、絲裂原活化蛋白激酶抑制劑SB203580、信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3抑制劑STAT21、蛋白激酶C抑制劑Rottlerin進(jìn)行作用，以流式細(xì)胞儀分析HCC827細(xì)胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3

4、的表達(dá)，并與空白對(duì)照組進(jìn)行比較。
　　3)以CIK細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞，HCC827細(xì)胞為靶細(xì)胞，乳酸脫氫酶釋放法檢測(cè)CIK細(xì)胞對(duì)未經(jīng)藥物作用組和厄洛替尼作用后組HCC827細(xì)胞的殺傷率，及檢測(cè)效靶比20∶1時(shí)經(jīng)NKG2D單抗封閉后的CIK細(xì)胞對(duì)兩組HCC827細(xì)胞的殺傷率。
　　結(jié)果:
　　1)與空白對(duì)照組比較，厄洛替尼5、10μmol/L組HCC827細(xì)胞表面NKG2D配體MICB、ULBP1表達(dá)顯著增高(P＜0.05)

5、，MICA、ULBP2、ULBP3表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;厄洛替尼5μmol/L組與10μmol/L組比較，細(xì)胞表面NKG2D配體MICA、MICB、ULBPI、ULBP2、ULBP3表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，表明鹽酸厄洛替尼增強(qiáng)了EGFR突變型人肺腺癌HCC827細(xì)胞表面NKG2D配體的表達(dá);
　　2)與空白對(duì)照組比較，SB203580組的HCC827細(xì)胞表面NKG2D配體MICA、MICB、ULBP

6、I、ULBP2、ULBP3表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，STAT21組的HCC827細(xì)胞表面NKG2D配體MICA、MICB表達(dá)增高(P＜0.05)，LY294002組的MICA表達(dá)降低(P＜0.05)，Rottlerin組的ULBP1表達(dá)增高(P＞0.05)，表明EGFR下游信號(hào)分子參與了HCC827細(xì)胞NKG2D配體表達(dá)的調(diào)控，抑制這些信號(hào)分子，可影響HCC827細(xì)胞NKG2D配體的表達(dá);
　　3)同一效靶比時(shí)，CIK

7、細(xì)胞對(duì)厄洛替尼作用后組HCC827細(xì)胞的殺傷率均顯著高于未經(jīng)藥物作用組(P＜0.05)，效靶比20∶1時(shí)經(jīng)NKG2D單抗封閉后的CIK細(xì)胞對(duì)未經(jīng)藥物作用組和10μmol/L厄洛替尼作用后組HCC827細(xì)胞的殺傷率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05），表明鹽酸厄洛替尼可增強(qiáng)CIK細(xì)胞對(duì)EGFR突變型人肺腺癌HCC827細(xì)胞的殺傷活性。
　　結(jié)論:
　　鹽酸厄洛替尼通過(guò)上調(diào)EGFR突變型人肺腺癌HCC827細(xì)胞表面NKG2D配體