吉非替尼聯(lián)合CIK細(xì)胞對A549-GR細(xì)胞的體外實驗研究.pdf

1、目的：國內(nèi)外的臨床研究充分肯定了吉非替尼為主要力量對于改善晚期非小細(xì)胞肺癌（non-smallcelllungcancer，NSCLC）生活質(zhì)量及生存周期。吉非替尼為表皮生長因子受體（epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR）。吉非替尼對NSCLC患者特別是有EGFR激酶區(qū)域特征性的突變（外顯子19缺失及外顯子21L858R突變）的具有顯著療效。但隨著患者治療時間的延長，最終均產(chǎn)生耐藥而導(dǎo)致疾病進展得不到控制

2、。而且，并非所有負(fù)載具有EGFR激酶區(qū)域特征性突變的（外顯子19缺失及外顯子21L858R突變）NSCLC者都有很強的療效，極易發(fā)生耐藥的有一部分是初始有效的病人。因此，研究如何提高吉非替尼的藥效及如何防止吉非替尼的耐藥；并且探索可以具有協(xié)同作用的新治療手段，開創(chuàng)新的聯(lián)合治療模式,對于更大程度發(fā)揮吉非替尼的作用及提高非小細(xì)胞肺癌患者臨床治療手段，具有臨床意義及治療價值。本研究旨在闡明吉非替尼與細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞（cytokineind

3、ucedkillercells，CIK細(xì)胞）聯(lián)合應(yīng)用于人肺腺癌細(xì)胞體內(nèi)外的意義，探討其在克服吉非替尼耐藥及增強其療效作用及意義。
　　方法：采取健康志愿者外周血中單個核細(xì)胞，添加IFN-γ和IL-2，抗CD3單抗聯(lián)合誘導(dǎo)至CIK細(xì)胞。應(yīng)用MTT比色法檢測吉非替尼組，CIK細(xì)胞組及CIK聯(lián)合吉非替尼組對吉非替尼耐藥細(xì)胞的增殖的抑制；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測吉非替尼組，CIK組，CIK聯(lián)合吉非替尼組對靶細(xì)胞凋亡的影響；采用免疫印跡法檢測磷酸

4、化測和總EGFR,Akt,Erk1/2,β-actin的表達；
　　結(jié)果：1.體外實驗說明CIK對A549/GR細(xì)胞殺傷力高于于A549細(xì)胞（P＜0.05）；CIK作用后的A549/GR細(xì)胞加入1.5μmol/L的吉非替尼即能使CIK：A549/GR效靶比為5:1組中的聯(lián)合殺傷率比單純使用CIK細(xì)胞組（相同效靶比）細(xì)胞殺傷率增加至2.4倍，比單純使用吉非替尼組（同劑量）增加7.2倍。且聯(lián)合殺傷率與效靶細(xì)胞比值增高成正比。
　

5、　2.效靶比CIK：A549/GR為5:1聯(lián)合吉非替尼組與單純使用吉非替尼組相比凋亡效應(yīng)非常明顯。
　　3.免疫印跡法檢測結(jié)果表明：經(jīng)過CIK聯(lián)合吉非替尼組作用后的A549/GR細(xì)胞總EGFR,Akt,Erk1/2,β-actin均比對照組下降明顯。
　　結(jié)論：1.CIK可明顯加強吉非替尼對A549/GR細(xì)胞的增殖抑制作用及凋亡效應(yīng)。
　　2.CIK具有部分逆轉(zhuǎn)A549/GR細(xì)胞株耐吉非替尼的作用。
　　3.CI