rh-Apo2L聯(lián)合厄洛替尼協(xié)同誘導人肺腺癌A549細胞凋亡及相關機制的實驗研究.pdf

1、目的：
　　觀察rh-Apo2L、厄洛替尼對人肺腺癌A549細胞的增殖抑制作用及促凋亡作用；探討r h-Apo2L聯(lián)合厄洛替尼協(xié)同誘導人肺腺癌A549細胞凋亡的相關機制。
　　方法：
　　1．檢測rh-Apo2L、厄洛替尼對A549細胞體外增殖的影響：采用CCK-8法檢測不同濃度的rh-Apo2L、厄洛替尼干預A549細胞24、48h后，各組細胞增殖情況，并計算藥物半數(shù)抑制濃度（IC50）。
　　2．檢測各組藥物

2、對A549細胞凋亡的影響：實驗分為空白對照組、rh-Apo2L組、厄洛替尼組、聯(lián)合給藥組。各組別藥物分別干預A549細胞48h，觀察其形態(tài)學變化及熒光染色變化；采用流式細胞儀檢測藥物干預A549細胞48h后，各組細胞凋亡率的變化。
　　3．檢測各組藥物干預后A549細胞相關蛋白的表達情況：采用Western blot技術檢測各組藥物干預A549細胞48h后，p-AKT、p-ERK、BAD蛋白的變化。
　　結果：
　　1

3、．CCK-8結果顯示：（1）rh-Apo2L、厄洛替尼在體外對A549細胞均具有一定的增值抑制作用，并呈濃度依賴性。rh-Apo2L對A549細胞的24h、48h半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為154.14μg/ml、91.89μg/ml，厄洛替尼對A549細胞的24h、48h半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為22.09μg/ml、14.89μg/ml；（2）兩藥聯(lián)合干預對A549細胞的生長抑制作用較單藥組強，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）

4、，兩藥相互作用指數(shù)為0.790，提示兩藥聯(lián)合應用具有協(xié)同抑制腫瘤細胞生長的作用。
　　2．FCM檢測結果顯示：rh-Apo2L聯(lián)合厄洛替尼干預A549細胞48h后，其凋亡率為56.23±3.27％，與rh-Apo2L（15.78±1.33%）、厄洛替尼（14.13±1.83%）單藥組相比，細胞凋亡率顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3．Western blot結果顯示：（1）rh-Apo2L單藥作用于A549

5、細胞可引起p-AKT、p-ERK蛋白水平的上調；（2）rh-Apo2L聯(lián)合厄洛替尼作用于A549細胞可下調p-AKT、p-ERK蛋白水平，并上調BAD蛋白水平，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論：
　　1.rh-Apo2L聯(lián)合厄洛替尼干預A549細胞顯示出較好的協(xié)同效應，可有效提高腫瘤細胞凋亡率；
　　2.rh-Apo2L引起的p-AKT、p-ERK蛋白水平的上調可能是A549細胞對rh-Apo2L敏感性差的