大田軟海綿酸對(duì)人肺腺癌細(xì)胞A549增殖的影響及凋亡誘導(dǎo)作用研究.pdf

1、分類號(hào)：Q952學(xué)校單位代碼：10446碩士學(xué)位論文論文題目：論文題目：大田軟海綿酸對(duì)人肺腺癌細(xì)胞大田軟海綿酸對(duì)人肺腺癌細(xì)胞A549增殖的影響增殖的影響及凋亡誘導(dǎo)作用研究及凋亡誘導(dǎo)作用研究研究生姓名：呂麗麗學(xué)科、專業(yè)：動(dòng)物學(xué)研究方向：動(dòng)物分子生物學(xué)導(dǎo)師姓名、職稱：王仁君教授趙云峰教授論文完成時(shí)間：2014年3月曲阜師范大學(xué)2011級(jí)碩士畢業(yè)論文I摘要研究背景：研究背景：近年來，有害赤潮在我國和世界各國沿海頻繁發(fā)生，嚴(yán)重破壞了海洋生態(tài)系統(tǒng)

2、的穩(wěn)定，并威脅海洋漁業(yè)安全和人類健康。特別是部分赤潮藻產(chǎn)生的赤潮毒素直接威脅魚類安全及人類身體健康。腹瀉性貝毒毒素（DSP）作為一類主要的赤潮藻毒素，能通過食物鏈富集作用或直接引發(fā)人類中毒，產(chǎn)生嘔吐，腹瀉等癥狀。DSP的主要活性成分大田軟海綿酸（OA）是由海洋甲藻產(chǎn)生的一種疏水性脂肪酸聚醚。已經(jīng)證實(shí)OA具有誘導(dǎo)癌變和促進(jìn)凋亡雙重效應(yīng)。有研究表明OA能夠引起人肝癌細(xì)胞，人結(jié)腸癌細(xì)胞，人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞等癌細(xì)胞系凋亡。目前利用相關(guān)細(xì)胞系進(jìn)行

3、OA毒性檢測(cè)并指導(dǎo)赤潮防治方面的研究報(bào)道較多。根據(jù)OA能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡這一特點(diǎn)，本文選取了非OA靶器官瘤細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞作為研究對(duì)象，意在研究OA對(duì)A549細(xì)胞系是否同樣具有凋亡誘導(dǎo)作用。本文通過研究大田軟海綿酸對(duì)人肺腺癌細(xì)胞A549增殖的影響，并進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察及亞顯微水平分析，最終確定OA對(duì)A549細(xì)胞系是否具有生長抑制作用并探討其原因，以期在細(xì)胞水平上為肺癌治療提供一定的理論基礎(chǔ)，為肺腺癌的治療尋求新的藥物。研究方法：研究方法：

4、1.MTT法及臺(tái)盼藍(lán)拒染試驗(yàn)（TBET）進(jìn)行細(xì)胞生長量的測(cè)定，分析OA對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響。2.Giemsa染色法、蘇木精伊紅染色法、倒置相差顯微鏡觀察、吖啶橙染色法、H33258染色法等實(shí)驗(yàn)觀察OA對(duì)A549細(xì)胞顯微水平形態(tài)學(xué)方面的影響。3.透射電鏡在亞顯微水平觀察A549細(xì)胞的變化情況。4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化情況。5.分光光度法測(cè)定Caspase酶活變化情況。研究結(jié)果：研究結(jié)果：1.MTT實(shí)驗(yàn)及臺(tái)盼藍(lán)拒染試驗(yàn)結(jié)果顯示：O

5、A作用于A549細(xì)胞后，細(xì)胞數(shù)目呈劑量時(shí)間依賴性減少，表明OA能抑制A549細(xì)胞的增殖。2.形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)：經(jīng)34ngmL及68ngmLOA處理48h后，A549細(xì)胞部分細(xì)胞間接觸消失，胞體變圓，膜皺縮，部分細(xì)胞懸浮脫離支持物，細(xì)胞核凝集破碎，產(chǎn)生凋亡小體，出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，且該現(xiàn)象有一定的劑量依賴性。3.細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果顯示：細(xì)胞表面微絨毛消失，細(xì)胞內(nèi)染色質(zhì)凝集、彎曲，趨邊呈新月形帽狀結(jié)構(gòu)，細(xì)胞內(nèi)空泡化現(xiàn)象明顯，可見清晰